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產(chǎn)品名稱	檢測方法	規(guī)格	貨號(hào)
3-磷酸甘油酸激酶（3-Phosphoglycerate kinase，PGK）試劑盒	微量法	100管/96樣	CS-01Ｓ63296

注意：正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

3-磷酸甘油酸激酶是糖酵解的關(guān)鍵酶，廣泛存在于動(dòng)植物和微生物體內(nèi)，催化1，3-二磷酸甘油酸轉(zhuǎn)變?yōu)?/span>3-磷酸甘油酸，產(chǎn)生1分子ATP，具有影響DNA復(fù)制和修補(bǔ)及刺激病毒RNA合成等生物學(xué)功能，廣泛應(yīng)用于藥物靶標(biāo)設(shè)計(jì)。

商品介紹：

測定原理

3-磷酸甘油酸激酶催化3-磷酸甘油酸和ATP產(chǎn)生1,3-二磷酸甘油酸和ADP，1,3-二磷酸甘油酸在3-磷酸甘油醛脫氫酶和NADH作用下產(chǎn)生3-磷酸甘油醛、NAD和磷酸，340nm處的吸光度變化反映了3-磷酸甘油酸激酶的活性的高低。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器

天平、低溫離心機(jī)、研缽、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板。

試劑組成和配制

提取液：液體100mL×2瓶，4℃保存。

試劑一：液體10mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑二：粉劑×1瓶，-20℃避光保存。臨用前加2mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

試劑三：粉劑×1支，-20℃避光保存。臨用前加1mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

試劑四：粉劑×1支，-20℃避光保存。臨用前加1 mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

試劑五：粉劑×1瓶，-20℃避光保存。臨用前加4 mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

酶液提取

①總PGK酶提取：建議稱取約0.1g樣本，加入1mL提取液，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇7s，總時(shí)間1min），然后4℃，500g離心5min，取上清測定。

②胞漿和葉綠體PGK酶的分離：按照植物組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5～10的比例（建議稱取約0.1g樣本，加入1mL提取液），冰浴勻漿后于4℃，500g離心5min，棄沉淀，取上清在4℃，8000g離心10min，取上清用于測定胞漿PGK酶活性，取沉淀加1mL提取液，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇7s，總時(shí)間1min），然后4℃，500g離心5min，取上清測定葉綠體中PGK酶活性。

建議測定總PGK酶活性，按照步驟①提取粗酶液，若需要分別測定胞漿和葉綠體中的PGK，則按照步驟②提取粗酶液。

測定操作

1.分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。

2.取微量石英比色皿/96孔板，依次加入100μL試劑一，20μL試劑二，10μL試劑三，10μL試劑四，40μL試劑五，20μL粗酶液，充分混勻，記錄340nm處10s的吸光值A1和310s的吸光值A2，△A=A1-A2

計(jì)算公式

a.用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下

（1）按照樣本蛋白濃度計(jì)算

酶活單位定義：每毫克組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

PGK（nmol/min /mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr

（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活單位定義：每克組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

PGK（nmol/min /g 鮮重）＝ΔA÷（ε×d）×V反總÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.54×ΔA÷W

V反總：反應(yīng)體系總體積，0.2mL；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.02mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時(shí)間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g

b.用96孔板測定的計(jì)算公式如下

（1）按照樣本蛋白濃度計(jì)算

酶活單位定義：每毫克組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

PGK（nmol/min /mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T=643.08×ΔA÷Cpr

（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活單位定義：每克組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

PGK（nmol/min /g 鮮重）＝ΔA÷（ε×d）×V反總÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=643.08×ΔA÷W

V反總：反應(yīng)體系總體積，0.2mL；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.02mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時(shí)間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g

注意：

1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請(qǐng)勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請(qǐng)勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿好實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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2、常用試劑備貨充足，除對(duì)溫度要求極其嚴(yán)格的產(chǎn)品當(dāng)天可發(fā)貨。

3、進(jìn)口原裝產(chǎn)品要3-6周的貨期，詳細(xì)情況請(qǐng)咨詢客服。

4、訂貨時(shí)間為工作日每周一至周五16:00之前。

5、如需代為檢測，標(biāo)本對(duì)環(huán)境溫度高，可聯(lián)系客服安排專人取樣（限省內(nèi)客戶）。

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