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標(biāo)簽:莽草酸脫氫酶(Shikimate dehydrogenase SD)試劑盒
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公司上萬種科研產(chǎn)品,主要供應(yīng)各大科研單位和學(xué)校,是國內(nèi)眾多科研單位的供應(yīng)商。公司嚴(yán)把質(zhì)量關(guān),確保每一個出廠產(chǎn)品質(zhì)量合格,讓您買的省心,用得放心。
產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
莽草酸脫氫酶(Shikimate dehydrogenase,SD)試劑盒 | 微量法 | 100管/96樣 | CS-01S63629 |
注意:正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
莽草酸途徑是存在于植物、真菌和微生物中的一條重要的代謝途徑,莽草酸脫氫酶是莽草酸合成途徑中的關(guān)鍵酶。
測定原理:
莽草酸脫氫酶催化莽草酸和NADP產(chǎn)生NADPH,檢測340nm下的吸光值增加速率來表示SD活性。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體25mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×2瓶,4℃保存;
粗酶液提取:
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
測定步驟:
1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至340nm,蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測定
(1)在試劑二中加入10mL試劑一充分溶解混勻,置于37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴5min,現(xiàn)配現(xiàn)用。
(2)在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本和190μL試劑二,混勻,立即記錄340nm處20s時的吸光值A1和 5min20s后的吸光值A2,計算ΔA=A2-A1。
SD活性計算:
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
(1)按樣本蛋白濃度計算:
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
SD(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算:
單位的定義:每g組織每分鐘產(chǎn)生1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
SD(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=643×ΔA÷W
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算:
單位的定義:每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
SD(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=1.286×ΔA
V反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4 L;ε:NADH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.01mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時間,5 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬。
b.用96孔板測定的計算公式如下
1)按樣本蛋白濃度計算:
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
SD(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=1286×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算:
單位的定義:每g組織每分鐘產(chǎn)生1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
SD(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=1286×ΔA÷W
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算:
單位的定義:每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
SD(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=2.572×ΔA
1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康,請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術(shù)有限公司
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1、報價含普票、運(yùn)費。
2、常用試劑備貨充足,除對溫度要求極其嚴(yán)格的產(chǎn)品當(dāng)天可發(fā)貨。
3、進(jìn)口原裝產(chǎn)品要3-6周的貨期,詳細(xì)情況請咨詢客服。
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