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產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
肌酸激酶(Creatine Kinase, CK)測定試劑盒 | 微量法 | 100T/96S | CS-01S63593 |
CK(EC
測定原理:
CK催化磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP,己糖激酶催化ATP與葡萄糖形成6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脫氫酶催化6-磷酸葡萄糖與NADP+生成NADPH,導致340nm光吸收值增加。
自備實驗用品及儀器:
天平、低溫離心機、恒溫水浴鍋、酶標儀、96孔板和蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:粉劑1瓶,4℃避光保存,使用前加10mL蒸餾水溶解。
試劑二:液體10mL×1瓶,4℃保存。
工作液:臨用前根據用量將試劑一和試劑二以1:1混合。使用前37℃溫育2min。
粗酶液提取:
1.組織樣本:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進行冰浴勻漿,然后10000g,4℃,離心15min。
2.血清樣本:直接測定。
測定操作表:
1. 酶標儀預熱30min,調節波長至340nm。
2.在96孔板中加入40μL樣本和60μL蒸餾水,最后加入100μL工作液,立即混勻,37℃下測定初始吸光值A1與1min后的吸光值A2,ΔA=A2-A1。
CK活性計算公式:
(1)按組織蛋白含量計算
酶活定義:37℃,pH7.0時,每毫克蛋白質1min內催化產生1nmol NADPH為一個酶活單位。
CK活性(nmol/min/ mg prot)=×V反總÷(V樣×Cpr)÷T= 1608×△A÷Cpr
(2)按組織樣本質量計算:
酶活定義:37℃,pH7.0時,每克樣品1min內催化產生1nmol NADPH為一個酶活單位。
CK活性(nmol/min/g 鮮重)= ×V反總÷(V樣÷V樣總×W)÷T= 1608×△A÷W
(3)按血清計算:
酶活定義:37℃,pH7.0時,每升血清1min內催化產生1nmol NADPH為一個酶活單位。
CK活性(nmol/min/mL)=×V反總÷V樣÷T= 1608×△A
:NADPH摩爾消光系數,6220 L /mol/cm;d:96孔板光徑,0.5cm;V反總:反應體系總體積,0.2mL;V樣:反應體系中樣本體積,0.04mL;T,反應時間,1min;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質量,g
注意事項:
1. 配制好的工作液4℃穩定7天,請配制后盡快使用。
2. 血清的CK不穩定,采集樣本后盡快測定,4℃避光保存可穩定24h。
3. 樣品蛋白質含量需要另外測定,可選用BCA蛋白含量測定試劑盒進行測定。
4. OD值大于0.5可用提取液適當稀釋樣品,并在計算公式中相應的改變稀釋倍數。
1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
2. 為了您的安全和健康,請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。
原創作者:上海莼試生物技術有限公司
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