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6-磷酸葡萄糖酸脫氫酶(6-PGDH)活性測定試微量法100T/96S

  • 產品貨號:CS-01S63592
  • 產品價格:電議
  • 產品產地:進口、國產
  • 包裝類型:100T/96S
  • 采購熱度:251
  • 庫存:100
  • CAS號:
  • 方法:微量法
  • 含量:
  • 品牌名稱:莼試
  • 分子式:
  • 分子量:

簡介內容:6-磷酸葡萄糖酸脫氫酶(6-PGDH)活性測定試質量可靠、價格優惠、效果穩定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點。

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標簽:6-磷酸葡萄糖酸脫氫酶(6-PGDH)活性測定試 

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產品名稱

檢測方法

規格

貨號

6-磷酸葡萄糖酸脫氫酶(6-PGDH)活性測定試

微量法

100T/96S

CS-0163592

 注意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:

磷酸戊糖途徑途徑中6-磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PDH)和6PGDH依次催化NADPH合成,與能量的平衡、生長速率和細胞活力等密切相關。此外,6PGDH逆境生理中具有重要作用。

商品介紹:

測定原理:

6PGDH催化6-磷酸葡萄糖酸和NADP+生成NADPH,NADPH340 nm有特征吸收峰,而NADP+沒有;通過測定340nm吸光度增加速率,計算6PGDH活性。

自備儀器和用品:

低溫離心機、水浴鍋、可調式移液槍、酶標儀、96孔板和蒸餾水。

試劑組成和配制:

提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。

試劑一:液體19mL×1瓶,4℃保存。

試劑二:粉劑×1瓶,-20℃避光保存。

試劑三:粉劑×1瓶,-20℃保存。

粗酶液提取:

1、細菌、細胞或組織樣品的制備:

細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為1000~50001的比例(建議2000萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

2、血清(漿)樣品:直接檢測。

測定操作:

1. 酶標儀預熱30min,調節波長到340 nm。

2將試劑二和試劑三轉移至試劑一中充分溶解;在37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴10min以上;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。

3. 96孔板,依次加入10μL樣本190μL試劑一,于340nm處測定3min內吸光值變化,第10 s吸光值記為A1,第190s吸光值記為A2?!?/span>A=A2-A1

注意:空白管只需要做一次。

計算公式:

使用96孔板測定的計算公式如下

1、血清(漿)6PGDH活力的計算:

單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘生成1 nmolNADPH定義為一個酶活力單位。

6PGDHnmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=2143.6×ΔA

2、組織、細菌或細胞中6PGDH活力的計算:

1)按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。

6PGDHnmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=2143.6×ΔA÷Cpr

2)按樣本鮮重計算:

單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。

6PGDHnmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=2143.6×ΔA÷W

3)按細菌或細胞密度計算:

單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。

6PGDHnmol/min /104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(2000×V樣÷V樣總) ÷T=1.072×ΔA

V反總:反應體系總體積,1×10-3 L;ε:NADPH摩爾消光系數,6.22×103 L / mol /cm;d96孔板光徑,0.5cm;V樣:加入樣本體積,0.05 mLV樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,3 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mLW:樣本質量,g;2000:細菌或細胞總數,2000萬。

注意:

1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
2. 為了您的安全和健康,請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創作者:上海莼試生物技術有限公司

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