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| 產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
| 6-磷酸葡萄糖脫氫酶（G6PDH）試劑盒 | 微量法 | 100管/96樣 | CS-01Ｓ63591 |
G6PDH（EC
測定原理：
G6PDH催化NADP+還原生成NADPH，在340 nm下測定NADPH增加速率。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體19 mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存；
試劑三：粉劑×1瓶，-20℃保存；
樣本的前處理：
1、細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為1000~5000：1的比例（建議2000萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
G6PDH測定操作表：
1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至340nm，蒸餾水調零。
2、將試劑二和試劑三轉移至試劑一中充分溶解；在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴10min以上；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
3、在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本和190μL試劑一，混勻后立即記錄340nm處1min后吸光值A1和 6min后的吸光值A2，計算ΔA=A2-A1。
注意事項：若ΔA大于0.5，需將酶液用提取液稀釋，計算公式中乘以相應稀釋倍數。或將反應時間縮短至2min，使A2-A1小于0.5，可提高檢測靈敏度。
G6PDH活力單位的計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、血清（漿）G6PDH活力的計算:
單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
G6PDH（nmol/min/mL）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=643×ΔA
2、組織、細菌或細胞中G6PDH活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
G6PDH（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
G6PDH（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=643×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
G6PDH（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(2000×V樣÷V樣總) ÷T=0.3215×ΔA
V反總：反應體系總體積，2×10-4 L；ε：NADPH摩爾消光系數，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；2000：細菌或細胞總數，2000萬。
b.用96孔板測定的計算公式如下
1、血清（漿）G6PDH活力的計算:
單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
G6PDH（nmol/min /mL）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=1286×ΔA
2、組織、細菌或細胞中G6PDH活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
G6PDH（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷ (V樣×Cpr) ÷T=1286×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
G6PDH（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=1286×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
G6PDH（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(2000×V樣÷V樣總) ÷T=0.643×ΔA
V反總：反應體系總體積，2×10-4 L；ε：NADPH摩爾消光系數，6.22×103 L / mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；2000：細菌或細胞總數，2000萬。
1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
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原創作者：上海莼試生物技術有限公司
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