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乙醇脫氫酶(ADH)活性測定試劑盒微量法100T/96S

  • 產品貨號:CS-01S63586
  • 產品價格:電議
  • 產品產地:進口、國產
  • 包裝類型:100管/96樣
  • 采購熱度:222
  • 庫存:100
  • CAS號:
  • 方法:微量法
  • 含量:
  • 品牌名稱:莼試
  • 分子式:
  • 分子量:

簡介內容:乙醇脫氫酶(ADH)活性測定試劑盒質量可靠、價格優惠、效果穩定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點。

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標簽:乙醇脫氫酶(ADH)活性測定試劑盒 

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產品名稱

檢測方法

規格

貨號

乙醇脫氫酶(ADH)活性測定試劑盒

微量法

100T/96S

CS-0163586

 注意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:

ADH是生物體內短鏈醇代謝的關鍵酶,催化乙醇與乙醛可逆轉換,在很多生理過程中起著重要作用。哺乳動物ADH主要在肝臟生成,肝臟損傷導致ADH釋放到血清中。血清ADH活性高低反映了肝功能是否異常。

商品介紹:

測定原理:

ADH催化NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+,NADH340nm處有吸收峰,而NAD+沒有;測定340nm 吸光度下降速率,來計算ADH活性。

自備儀器和用品:

研缽、冰、低溫離心機、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、可調式移液器和蒸餾水。

試劑組成和配制:

試劑一:液體×1瓶,室溫保存。

試劑二:液體×1瓶,4℃保存。

試劑三:粉劑×2瓶,-20℃保存,臨用前每瓶加入9mL試劑二,現配現用。

試劑四:液體×1支,4℃保存。

粗酶液提?。?/span>

1、組織:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿。16000g4℃離心20min,取上清置冰上待測。

2、細菌、真菌:按照細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);16000g, 4℃離心20min,取上清液置冰上待測。

3、血清等液體:直接測定。

ADH測定操作:

1. 分光光度計/酶標儀預熱30 min,調節波長到340 nm,蒸餾水調零。

2. 試劑三在25℃水浴中保溫30 min。

3. 在微量石英比色皿/96孔板中依次加入20μL樣本上清液、160μL試劑三和20μL試劑四,迅速混勻后于340nm測定吸光值變化,分別記錄15s75s時吸光值,分別記為A1A2。△A測定管=A1-A2。

計算公式:

a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1)按照蛋白濃度計算

活性單位定義:25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol NADH 1個酶活單位。

ADH (nmol/min/mg prot) =(A÷ε÷d×V反總×109)÷(Cpr×V)÷T

=1608×△A ÷Cpr

2)按照樣本質量計算

活性單位定義:25℃中每克組織每分鐘氧化1nmol NADH 1個酶活單位。

ADH (nmol/min/g 鮮重) =(A÷ε÷d×V反總×109)÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=1608×△A ÷W

3)按細胞數量計算

活性單位定義:25℃中每104個細胞每分鐘氧化1nmol NADH 1個酶活單位。

ADH (nmol/min/104cell) = (A÷ε÷d×V反總×109) ÷(細胞數量×V樣÷V樣總)÷T

=1608×△A ÷細胞數量

4)按液體體積計算

活性單位定義:25℃中每毫升血清每分鐘氧化1nmol NADH 1個酶活單位。

ADH (nmol/min/mL) =(A÷ε÷d×V反總×109) ÷V樣÷T

=1608×△A

ε:NADH摩爾消光系數,6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光徑,1 cm;V反總:反應體系總體積,200μL=2×10-4 L;Cpr:上清液蛋白質濃度,mg/mL;W :樣品質量;V樣:加入反應體系中上清液體積,20μL=0.02 mL;V樣總:提取液體積,1 mLT:反應時間,1min。

b.使用96孔板測定的計算公式如下

1)按照蛋白濃度計算

活性單位定義:25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol NADH 1個酶活單位。

ADH (nmol/min/mg prot) =(A÷ε÷d×V反總×109) ÷(Cpr×V)÷T

=3215×△A÷Cpr

2)按照樣本質量計算

活性單位定義:25℃中每克組織每分鐘氧化1nmol NADH 1個酶活單位。

ADH (nmol/min/g 鮮重) =(A÷ε÷d×V反總×109) ÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=3215×△A÷W

3)按細胞數量計算

活性單位定義:25℃中每104個細胞每分鐘氧化1nmol NADH 1個酶活單位。

ADH (nmol/min/104cell) =(A÷ε÷d×V反總×109) ÷(細胞數量×V樣÷V樣總)÷T

=3215×△A÷細胞數量

4)按液體體積計算

活性單位定義:25℃中每毫升血清每分鐘氧化1nmol NADH 1個酶活單位。

ADH (nmol/min/mL) =(A÷ε÷d×V反總×109) ÷V樣÷T

=3215×△A

ε:NADH摩爾消光系數,6.22×103L/mol/cmd96孔板光徑,0.5 cm;V反總:反應體系總體積,200μL=2×10-4 LCpr:上清液蛋白質濃度,mg/mL;W :樣品質量;V樣:加入反應體系中上清液體積,20μL=0.02 mL;V樣總:提取液體積,1 mLT:反應時間,1min。

注意:

1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
2. 為了您的安全和健康,請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創作者:上海莼試生物技術有限公司

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