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標(biāo)簽:胃蛋白酶（Pepsin）試劑盒
聯(lián)系人:高小姐
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詳細地址：上海嘉定區(qū)嘉羅公路1661
公司上萬種科研產(chǎn)品，主要供應(yīng)各大科研單位和學(xué)校，是國內(nèi)眾多科研單位的供應(yīng)商。公司嚴把質(zhì)量關(guān)，確保每一個出廠產(chǎn)品質(zhì)量合格，讓您買的省心，用得放心。
| 產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 胃蛋白酶（Pepsin）試劑盒 | 微量法 | 100T/48S | CS-01Ｓ63577 |
胃蛋白酶由胃粘膜主細胞分泌，分解食物中蛋白質(zhì)成小肽段。一般用于神經(jīng)性低酸癥的鑒別，慢性胃炎、慢性胃擴張、慢性十二指腸炎等癥狀時也會引起胃蛋白酶分泌的減少。
測定原理：
胃蛋白酶可催化血紅蛋白水解，水解產(chǎn)物與福林試劑反應(yīng)后顯藍色；一定范圍內(nèi)，其顏色的深淺與胃蛋白酶活性呈正比。
自備儀器和用品：
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體20mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加入10mL試劑二充分溶解。
試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入10mL蒸餾水充分溶解。
試劑五：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入15mL蒸餾水充分溶解。
試劑六：液體3.3mL×1瓶，4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體1.27mL×1支，0.5μmol/mL酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度4℃保存。
粗酶液提?。?/span>
組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清，即粗酶液。
測定步驟：
1.分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到580 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑三和試劑四置于37℃水浴預(yù)熱30min。
3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取微量玻璃比色皿/96孔板，加入20μL標(biāo)準(zhǔn)品，40μL試劑二，120μL試劑五，20μL試劑六，混勻后室溫靜置20min，于580 nm測光吸收，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
4. 空白管：取微量玻璃比色皿/96孔板，加入20μL蒸餾水，40μL試劑二，120μL試劑五，20μL試劑六，混勻后室溫靜置20min，于 580 nm測光吸收，記為A標(biāo)準(zhǔn)空白管。
5. 對照管：取 EP管，加入100 μL蒸餾水，置于37℃水浴保溫10min；加入100μL試劑四，蓋緊后搖勻1min；加入20μL粗酶液，混勻后8000g 4℃離心10分鐘取上清；在微量玻璃比色皿/96孔板加入上清液20μL，再加入40μL試劑二，120μL試劑五，20μL試劑六，混勻后室溫靜置20min，于580 nm測光吸收，記為A空白管。
6. 測定管：取 EP管，加入20μL粗酶液，100μL試劑三，置于37℃水浴保溫10min；加入100μL試劑四，蓋緊后搖勻1min；8000g 4℃離心10分鐘取上清；在微量玻璃比色皿/96孔板加入上清液20μL，再加入40μL試劑二，120μL試劑五，20μL試劑六，混勻后室溫靜置20min，于 580 nm測光吸收，記為A測定管。
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要測定一次。
計算公式：
a.使用微量玻璃比色皿測定的計算公式如下
（1）按蛋白濃度計算
活性單位定義：37℃每毫克蛋白每分鐘催化血紅蛋白水解生成1nmol酪氨酸為1個酶活單位。
胃蛋白酶活性（nmol/min/mg prot）= C標(biāo)準(zhǔn)品×（A測定管－A對照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）×稀釋倍數(shù)÷（Cpr×V1）÷T
=27500×（A測定管－A對照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計算
活性單位定義：37℃每克組織每分鐘催化血紅蛋白水解生成1nmol酪氨酸為1個酶活單位。
胃蛋白酶活性（nmol/min/g 鮮重）= C標(biāo)準(zhǔn)品×（A測定管－A對照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）×稀釋倍數(shù)÷（W×V1÷V2）÷T
=27500×（A測定管－A對照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）÷W
C標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，0.5 μmol/mL酪氨酸；稀釋倍數(shù)：（20+100+100）÷20=11；Cpr：粗酶液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL），需要另外測定；V1：加入反應(yīng)體系中粗酶液體積（mL），20μL=2×10-2mL；W：組織質(zhì)量（g）；V2：粗酶液總體積（mL），1mL；T：催化反應(yīng)時間（min），10min。
b.使用96孔板測定的計算公式如下
（（1）按蛋白濃度計算
活性單位定義：37℃每毫克蛋白每分鐘催化血紅蛋白水解生成1nmol酪氨酸為1個酶活單位。
胃蛋白酶活性（nmol/min/mg prot）= C標(biāo)準(zhǔn)品×（A測定管－A對照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）×稀釋倍數(shù)÷（Cpr×V1）÷T
=27500×（A測定管－A對照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計算
活性單位定義：37℃每克組織每分鐘催化血紅蛋白水解生成1nmol酪氨酸為1個酶活單位。
胃蛋白酶活性（nmol/min/g 鮮重）= C標(biāo)準(zhǔn)品×（A測定管－A對照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）×稀釋倍數(shù)÷（W×V1÷V2）÷T
=27500×（A測定管－A對照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）÷W
C標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，0.5 μmol/mL酪氨酸；稀釋倍數(shù)：（20+100+100）÷20=11；Cpr：粗酶液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL），需要另外測定；V1：加入反應(yīng)體系中粗酶液體積（mL），20μL=2×10-2mL；W：組織質(zhì)量（g）；V2：粗酶液總體積（mL），1mL；T：催化反應(yīng)時間（min），10min。
注意事項
試劑三、試劑四、試劑五臨用前配制，配制好用不完的試劑4℃可保存一周。
1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。
原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司
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1、報價含普票、運費。
2、常用試劑備貨充足，除對溫度要求極其嚴格的產(chǎn)品當(dāng)天可發(fā)貨。
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