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酸性蛋白酶（Acid protease, ACP）試劑盒分光光度法50管/24樣

  • 產品貨號：CS-01Ｓ63227
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：進口、國產
  • 包裝類型:50管/24樣
  • 采購熱度：653
  • 庫存：56
  • CAS號：
  • 方法：分光光度法
  • 含量：
  • 品牌名稱:莼試
  • 分子式：
  • 分子量：

簡介內容：酸性蛋白酶（Acid protease, ACP）試劑盒質量可靠、價格優惠、效果穩定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點。

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標簽:酸性蛋白酶（Acid protease  ACP）試劑盒 

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產品名稱

檢測方法

規格

貨號

酸性蛋白酶（Acid protease, ACP）試劑盒

分光光度法

50管/24樣

CS-01Ｓ63227
 注意：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
ACP是一種在酸性環境下催化蛋白質水解的酶。該酶主要用于酒精發酵、啤酒釀造、毛皮軟化、果酒澄清、醬油釀造、飼料等。 
商品介紹：

測定原理：

酸性條件下，ACP催化酪蛋白水解產生酪氨酸；在堿性條件下，酪氨酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍；鎢藍在680nm有特征吸收峰，通過測定其吸光度增加，來計算ACP活性。

自備儀器和樣品：

可見分光光度計、水浴鍋、磁力攪拌器、可調式移液槍、1mL玻璃比色皿、1.5 mL EP管和蒸餾水。

試劑組成和配置：

液體一：1.5mL×1支，4℃保存。

液體二：1mL×1支，4℃保存。

試劑一的配制：臨用前按液體一：液體二：蒸餾水=76（μL）：17（μL）：18（mL）的比例配制，現配現用，如出現白色絮狀沉淀則不能用。

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加10 mL蒸餾水溶解。

試劑三：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加入20 mL試劑一，沸水浴中磁力攪拌溶解。（可在燒杯上蓋一層保鮮膜，注意觀察，避免水分全部蒸發，一般加熱15-30分鐘，該試劑為過飽和試劑，充分混勻后仍出現顆粒物不溶物不影響使用）。

試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入50 mL蒸餾水溶解。

試劑五：液體10mL×1瓶，4℃保存。

標準品：液體1mL×1支，0.25 μ mol/mL標準酪氨酸溶液，4℃保存。

粗酶液提取：

1.  試劑一的配制：見試劑的組成和配制。

2.  組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清，即粗酶液。

3.  血清或培養液：直接測定。

4.  細菌、真菌：按照細胞數量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。

測定操作：

1.分光光度計預熱30min，調節波長到680 nm，蒸餾水調零。

2.試劑二、試劑三和試劑四置于30℃水浴保溫30min。

3. 對照管：取一支EP管，加入100μL粗酶液，200μL試劑二，混勻后置于30℃水浴保溫10min；加入200μL試劑三，混勻后8000g， 4℃離心10min；取200μL上清液，加入新的EP管，再加入1000μL試劑四，200μL試劑五，混勻后置于30℃水浴保溫20min，于680nm測定光吸收，記為A對照管。

4. 測定管：取一支EP管，加入100μL粗酶液，200μL試劑三，混勻后置于30℃水浴保溫10min；加入200μL試劑二，混勻后8000g， 4℃離心10min；取200μL上清液，加入新的EP管，再加入1000μL試劑四，200μL試劑五，混勻后置于30℃水浴保溫20min，于680nm測定光吸收，記為A測定管。（注意與空白管不同，先加試劑三，后加試劑二）

5. 空白管：取EP管，加入200μL蒸餾水，1000μL試劑四，200μL試劑五，混勻后置于30℃水浴保溫20min，于680nm測定光吸收，記為A空白管。

6. 標準管：取EP管，加入200μL標準品，1000μL試劑四，200μL試劑五，混勻后置于30℃水浴保溫20min，于680nm測定光吸收，記為A標準管。

注意：空白管和標準管只需要測定一次。

ACP活性計算公式：

1. 按照樣本蛋白濃度計算

ACP活性單位定義：30℃每毫克蛋白每分鐘水解產生1nmol酪氨酸為1個酶活單位。

ACP活性（nmol/min /mg prot）= C標準品×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）×V反總÷(Cpr×V1)÷T= 125×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）÷Cpr

2．按照樣本質量計算

ACP活性單位定義：30℃每克樣品每分鐘催化水解產生1 nmol酪氨酸為1個酶活單位。

ACP活性（nmol/min /g鮮重）=C標準品×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）×V反總÷（W×V1÷V2）÷T= 125×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）÷W

3. 按照液體體積計算

ACP活性單位定義：30℃每毫升樣品每分鐘催化水解產生1nmol酪氨酸為1個酶活單位。

ACP活性（nmol/min/mL）=C標準品×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）×V反總÷V1÷T= 125×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）

1.按照細胞數量計算

ACP活性單位定義：30℃每104個細胞每分鐘催化水解產生1nmol酪氨酸為1個酶活單位。

ACP活性（nmol/min /104 cell）=C標準品×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）×V反總÷（細胞數量×V1÷V2）÷T= 125×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）÷細胞數量

C標準品：0.25 μ mol/mL標準酪氨酸溶液；V反總：酶促反應總體積，0.5mL；Cpr：粗酶液蛋白質濃度（mg/mL）；V1：加入反應體系中粗酶液體積（mL），0.1 mL；V2：提取液總體積（mL），1mL；T：催化反應時間（min），10min；W：樣品質量（g）。

注意事項：

1.試劑一按操作指示配制，用多少配多少，出現白色絮狀沉淀則不能用。

2.臨用前配制的試劑配置好后3天內使用完畢。

注意：
1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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