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標(biāo)簽:氨基酸(amino acid AA)含量測定試劑盒
聯(lián)系人:高小姐
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| 產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 氨基酸(amino acid, AA)含量測定試劑盒 | 分光光度法 | 50管/48樣 | CS-01Ｓ63222 |
肝臟、腎臟是氨基酸代謝的主要器官，故尿中氨基酸的變化最能反應(yīng)肝、腎的生理狀態(tài)。另外，氨基酸還能反應(yīng)灼傷、傷寒等方面情況。植物體內(nèi)氨基酸含量對研究植物在不同條件下及不同生長發(fā)育時期氮代謝變化、植物對氮素的吸收、運(yùn)輸、同化及營養(yǎng)狀況等有重要意義。
測定原理：
氨基酸的α-氨基可與水合茚三酮反應(yīng)，產(chǎn)生藍(lán)紫色化合物，在570 nm有特征吸收峰；通過測定570 nm吸光度，來計算氨基酸含量。
自備儀器及用品：
臺式離心機(jī)、可見分光光度計、水浴鍋、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽、無水乙醇、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1瓶（棕色），4℃避光保存。臨用前加入2 mL無水乙醇，蓋緊后充分混勻，再加入28mL蒸餾水混勻，避光保存。
試劑四：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加5 mL蒸餾水，充分溶解。
標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1瓶，臨用前加10 mL蒸餾水，充分溶解。1μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液，4℃避光保存。
樣品中AA提取：
1.按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行室溫勻漿，然后轉(zhuǎn)移到1.5 mL EP 管中，蓋緊后（防止水分散失）置于沸水浴提取15 min；自來水冷卻后，8000g，4℃離心10min，上清液置冰上待測。
2.細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
3.血清等液體：直接檢測。
測定操作：
1. 分光光度計預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長到570 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 空白管：取EP管，加入50μL蒸餾水，500μL試劑二，500μL試劑三和50μL試劑四，混勻后蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置于沸水浴中保溫15 min，冷卻后反復(fù)顛倒EP管數(shù)次，于570nm測定吸光值，記為A空白管。顯色后務(wù)必在30min內(nèi)測完。
3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取EP管，加入50μL標(biāo)準(zhǔn)品，500μL試劑二，500μL試劑三和50μL試劑四，混勻后蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置于沸水浴中保溫15 min，冷卻后反復(fù)顛倒EP管數(shù)次，于570nm測定吸光值，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。顯色后務(wù)必在30min內(nèi)測完。
4. 測定管：取EP管，加入50μL上清液，500μL試劑二，500μL試劑三和50μL試劑四，混勻后蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置于沸水浴中保溫15 min，冷卻后反復(fù)顛倒EP管數(shù)次，于570nm測定吸光值，記為A測定管。顯色后務(wù)必在30min內(nèi)測完。
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要測定一次。
氨基酸含量計算公式：
（1）按照樣本質(zhì)量計算
氨基酸含量（μmol /g鮮重）=[C標(biāo)準(zhǔn)品×V標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)]×（V樣總÷V樣）÷W
=1×(A測定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管) ÷W
（2）按照樣本蛋白濃度計算
氨基酸含量（μmol /mg prot）=[C標(biāo)準(zhǔn)品×V標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)]÷（V樣×Cpr）
=1×(A測定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管) ÷Cpr
（3）按照細(xì)胞數(shù)量計算
氨基酸含量（μmol /104 cell）=[C標(biāo)準(zhǔn)品×V標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)] ×（V樣總÷V樣×細(xì)胞數(shù)量）
=1×(A測定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管) ÷細(xì)胞數(shù)量
（4）按照液體體積計算
氨基酸含量（μmol /mL）=[C標(biāo)準(zhǔn)品×V標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)]÷V樣
=1×(A測定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)
C標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，1 μ mol/mL；V標(biāo)準(zhǔn)品：反應(yīng)體系中加入標(biāo)準(zhǔn)品體積，0.05 mL；W：樣品質(zhì)量，g；V樣：反應(yīng)體系中加入樣品提取液體積，0.05 mL；V樣總：樣品提取液總體積，1mL，Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL。
注意事項：
1. 試劑盒中試劑三、試劑四和標(biāo)準(zhǔn)品均需臨用前配制，且避光保存，配制好未使用完的4℃保存且3天內(nèi)使用完畢。
2. 為保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，需先取1-2個樣做預(yù)實驗，如果測定的吸光值過高（高于2.5），用蒸餾水稀釋后再測定。
3. 脯氨酸和羥脯氨酸與茚三酮反應(yīng)在570nm處無吸收峰，因此，570nm處測定結(jié)果不含這兩種氨基酸的量。
4．最低檢出限為100μmol/L。
原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司
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