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細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；之后置90℃振蕩提取10min；10000g，25℃離心10min，取上清，冷卻后待測。

組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿；之后置90℃振蕩提取10min；10000g，25℃離心10min，取上清，冷卻后待測。

2、血清（漿）樣品：按照血清（漿）體積（mL）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議取0.1mL血清（漿）加入1mL提取液），充分混勻，之后置90℃振蕩提取10分鐘，10000g，25℃離心10分鐘，取上清，冷卻后待測。

測定步驟：

1、分光光度計預熱30min以上，調節波長至520nm，蒸餾水調零。

2、樣本測定：

(1)取0.5mL樣本+0.5mL試劑一+0.5mL試劑二于有蓋試管中，置沸水浴中保溫30min（蓋緊，防止水分散失），每10min振蕩一次。

(2)待冷卻后，在試管中加入1mL試劑三，振蕩30s，靜置片刻，使色素轉至試劑三中；吸取0.8mL-1mL上層溶液于1mL玻璃比色皿中，于520nm波長處比色，記錄吸光值A。

Pro含量計算：

1、典型回歸方程y = 0.0521x - 0.0021 (x為脯氨酸含量，μg/mL；y為吸光值A)

2、按照血清（漿）體積計算

Pro含量(μg/mL)=[(A+0.0021) ÷0.0521×V1]÷(V3×V1÷V2）=192×(A+0.0021)

3、按照蛋白濃度計算

Pro含量(μg/mg prot)=[(A+0.0021) ÷0.0521×V1]÷(V1×Cpr)=19.2×(A+0.0021)÷Cpr

4、按照樣本質量計算

Pro含量(μg/g鮮重)= [(A+0.0021) ÷0.0521×V1]÷(W×V1÷V2)=19.2×(A+0.0021) ÷W

5、按照細菌或細胞密度計算

Pro含量(μg/104 cell)=[(A+0.0021) ÷0.0521×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0384×(A+0.0021)

V1：加入反應體系中樣本體積，0.5mL；V2：加入提取液體積，1 mL；V3：加入血清（漿）體積，0.1 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬。

注意：最低檢測限為1μg/mL或1μg/g鮮重或0.01μg/mg prot

注意：

1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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