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產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
還原型谷胱甘肽(reduced glutathione, GSH)試劑盒 | 分光光度法 | 50管/48樣 | CS-01S63248 |
GSH是細胞內最主要的抗氧化巰基物質,在抗氧化、蛋白質巰基保護和氨基酸跨膜運輸等中具有重要作用。還原型與氧化型比值(GSH/GSSG)是細胞氧化還原狀態的主要動態指標。因此,測定細胞內GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值,能夠很好地反映細胞所處的氧化還原狀態。
測定原理:
DTNB與GSH反應生成復合物,在412nm處有特征吸收峰;其吸光度與GSH含量成正比。
自備儀器和用品:
可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調節移液器、1mL玻璃比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體×1瓶,4℃避光保存。
粗酶液提?。?/span>
1.組織:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿。8000g,4℃離心10min,取上清置冰上待測。
2.細菌、真菌:按照細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。
3.血清等液體:直接測定。
GSH測定操作:
1. 分光光度計預熱30min,調節波長到412 nm,蒸餾水調零。
2. 試劑二置于25℃(一般物種)或者37℃(哺乳動物)水浴中保溫30min。
3. 空白管:取1mL玻璃比色皿,依次加入100μL蒸餾水,700μL試劑二,200μL試劑三,混勻靜置2min后測定412 nm吸光度A1。
4. 測定管:取1mL玻璃比色皿,依次加入100μL上清液,700μL試劑二,200μL試劑三,混勻靜置2min后測定412 nm吸光度A2。
注意:空白管只需要測定一次。
GSH含量計算公式:
GSH標準曲線公式:y=1.5 x(x為GSH濃度,μ mol /mL;y為吸光值)
GSH計算:
(1)按蛋白濃度計算
GSH(μ mol/ mg prot)=(A2-A1) ÷1.5×V樣÷(V樣×Cpr )=0.667×(A2-A1) ÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算
GSH(μ mol/g鮮重)=(A2-A1) ÷1.5×V樣÷(V樣÷V樣總×W)=0.667×(A2-A1) ÷W
(3)按細胞數量計算
GSH(μ mol /104 cell)=(A2-A1) ÷1.5×V樣÷(V樣÷V樣總×細胞數量)=0.667×(A2-A1) ÷細胞數量
(4)按液體體積計算
GSH(μ mol/ mL)=(A2-A1) ÷1.5×V樣÷V樣 =0.667×(A2-A1)
V樣總:上清液總體積,1 mL;V樣:加入反應體系中上清液體積,100μL=0.1 mL;W:樣品質量,g ;Cpr:上清液蛋白質濃度,mg/mL;
注意事項:
1.試劑一中含有蛋白質沉淀劑,因此上清液不能用于蛋白濃度測定。
2.最低檢出限為0.01mmol/L。
原創作者:上海莼試生物技術有限公司
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