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標(biāo)簽:乙醇酸氧化酶(glycollic oxidase GO)試劑盒
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產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
乙醇酸氧化酶(glycollic oxidase, GO)試劑盒 | 分光光度法 | 50管/48樣 | CS-01S63252 |
乙醇酸氧化酶(EC
測定原理
乙醇酸氧化酶催化乙醇酸氧化生成乙醛酸,乙醛酸和鹽酸苯肼反應(yīng)生成乙醛酸苯腙,在324nm有特征吸收峰。
自備實驗用品及儀器
天平、低溫離心機、紫外分光光度計、1mL石英比色皿。
試劑組成和配制
提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體35mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×1瓶,4℃避光保存,臨用前加10mL雙蒸水溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
試劑三:液體5mL×1瓶,4℃保存。
酶液提取
按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。12000g, 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
測定操作表
圖
酶活性計算公式
1.按照蛋白濃度計算
酶活性定義:每毫克蛋白每分鐘氧化1 nmol乙醇酸所需的酶量為一個酶活力單位。
GO活性(nmol/min /mg prot)= ×V反總÷(V樣×Cpr)÷T= 392×△A÷Cpr
2.按照樣本質(zhì)量計算
酶活性定義:每克組織每分鐘氧化1 nmol乙醇酸所需的酶量為一個酶活力單位。
GO活性(nmol/min /g 鮮重)= ×V反總÷(V樣×W÷V樣總)÷T= 392×△A÷W
ε:乙醛酸苯腙毫摩爾消光系數(shù):17L/mmol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V反總:反應(yīng)總體積,1mL;V樣:反應(yīng)中樣本體積,0.05mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W,樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時間,3min
注意事項
1.測定之前進(jìn)行預(yù)實驗,若吸光值較高,請將樣品用提取液進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂屧贉y定,并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
2.色素含量較高的樣品,可在提取酶時加活性炭吸附。
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術(shù)有限公司
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