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產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
果膠酯酶(pectinesterase,PE)試劑盒(NaOH滴定法) | 50管/48樣 | 50管/48樣 | CS-01S63258 |
果膠酯酶, 屬果膠酶系,亦稱為果膠酶、果膠甲酯酶、果膠氧化酶。催化水解果膠長鏈上的甲氧酯水解產生小分子物質果膠酸和甲醇, 從而增加果膠在水中的溶解度。廣泛存在于高等植物和可以降解細胞壁的細菌和真菌中,起內源調控植物細胞壁上及細胞之間果膠含量的作用,在食品工業中具有及其重要的作用和開發前景。
測定原理
果膠酯酶催化水解果膠分子釋放H+,使反應體系的pH下降,用堿液維持體系的pH始終保持在7.8(酚酞指示劑維持在粉紅色),通過堿消耗的NaOH量反映果膠酯酶的活性。
需自備的儀器和用品
天平、研缽、離心機、烘箱。
試劑的組成和配制
提取液:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前每瓶加雙蒸水100mL充分溶解。
試劑一:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加少量蒸餾水溶解,然后轉入500mL容量瓶,用蒸餾水定容至500mL。
試劑二:液體×1瓶,4℃保存。易揮發,使用后及時用封口膜封口。
試劑三:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑四:用蒸餾水將試劑三稀釋5倍,得試劑四。
樣品處理
稱取1g組織樣品,加入2mL提取液冰浴充分研磨(研缽提前-20℃預冷10min,提取液提前4℃預冷?梢愿鶕蛻糇约旱臉颖咎厥庑裕孕邪幢壤{整),12000g、4℃離心15min,取全部上清液待測。
測定操作
1.試劑一于37℃烘箱保溫10min,樣本全部提取上清(約2mL)分別轉移至15 mL離心管或者試管中。
2.向樣本上清中分別加入50μL試劑二,混勻。然后每管加入8 mL試劑一混勻,并用試劑四調節pH至7.8(粉紅色)。
3.將上述各離心管或試管放置37℃烘箱60分鐘。每隔20分鐘用試劑四調節pH,使pH維持在7.8(粉紅色)。記錄所消耗的試劑四的體積V(mL)。
計算公式
酶活定義:每g組織每分鐘消耗1μmol NaOH定義為一個酶活單位U。
PE活性(U/g)= 20VF/(TW)= VF/(3W)
V:滴定所消耗的試劑四的量,mL;T:反應時間,60 min;F:樣品稀釋倍數;W:樣品質量,g
注意事項
1.試劑一提前預熱,保證酶反應速率。
2.實驗前先做預實驗,如果酶活力太高,適當調整樣本稀釋倍數,如將樣品稀釋2-5倍進行測定,并在計算公式中乘以稀釋倍數。
原創作者:上海莼試生物技術有限公司
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