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產品名稱	檢測方法	規格	貨號
L-半乳糖酸-1,4-內酯脫氫酶（L-galactono-1,4-lactone dehydrogenase，Gal LDH）活性測定試劑盒	分光光度法	50管/48樣	CS-01Ｓ63260

正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：

L-半乳糖途徑是合成AsA的主要途徑。Gal LDH位于線粒體內膜，負責催化植物體內AsA生物合成的最后一步，也是該途徑的關鍵酶之一，對植物體內AsA含量的積累起著至關重要的作用。

商品介紹：

測定原理：

Gal LDH催化L-半乳糖內酯還原細胞色素c（Cyt c），還原型Cyt c在550nm有吸收峰；測定還原型Cyt c增加速率，來計算Gal LDH活性。

自備儀器和用品：

臺式離心機、可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、可調式移液器、研缽、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：液體50mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入40mL蒸餾水，充分溶解。

試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入5mL蒸餾水，充分溶解。

粗酶液提取：

按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿。13000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。

Gal LDH測定操作：

1. 分光光度計預熱30 min，調節波長到550nm，蒸餾水調零。

2. 試劑二在25℃水浴鍋中預熱30 min。

3. 依次在1mL玻璃比色皿中加入100μL上清液、800μL預熱的試劑二和100μL試劑三，迅速混勻后于550nm比色，記錄10s和130s的吸光值A1和A2，△A = A2﹣A1。

Gal LDH活性計算公式：

(1). 按蛋白濃度計算

Gal LDH活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘還原1nmol Cyt c 為1個酶活單位。

Gal LDH (nmol/min/mg prot) = △A÷ε÷d×V反總×109÷（Cpr×V樣）÷T

=289×△A ÷Cpr

(2). 按樣本質量計算

Gal LDH活性單位定義：25℃中每克樣品每分鐘還原1nmol Cyt c 為1個酶活單位。

Gal LDH (nmol/min/g鮮重) = △A÷ε÷d×V反總×109÷（W×V樣÷V樣總）÷T

=289×△A ÷W

ε：還原型Cyt c摩爾消光系數，17.3×103L/ mol/cm；d：比色皿光徑(cm)，1cm；V反總：反應體系總體積，1mL=0.001 L；109：1mol=1×109nmol；V樣：加入反應體系中上清液體積，100μL=0.1mL；Cpr：上清液蛋白濃度，mg/mL，蛋白質濃度需要另外測定，建議使用本公司蛋白質含量BCA試劑盒；V樣總：加入提取液體積，1mL；W，樣本質量，g；T：反應時間，2min。

注意事項:

試劑二和試劑三配制好后3天內使用完。

注意：

1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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