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產品名稱	檢測方法	規格	貨號
抗壞血酸氧化酶（ascorbate oxidase，AAO）活性測定試劑盒	分光光度法	50管/48樣	CS-01Ｓ63264

注意：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

AAO是定位于植物細胞壁的糖蛋白，屬“藍銅氧化酶”家族。細胞壁內的抗壞血酸和AAO與細胞壁的代謝和生長有著密切的聯系。AAO 氧化 AsA 所形成的 MDHA 可通過質膜上的細胞色素b還原，該過程中電子的跨膜運輸能夠促進細胞生長。

商品介紹：

測定原理：

AAO可直接氧化AsA，通過測定AsA的氧化量，可計算得AAO活力。

實驗中所需儀器及設備：

低溫離心機、紫外分光光度計、1mL石英比色皿、可調式移液器、研缽、冰、蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：液體50mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體50mL×1瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入5mL蒸餾水充分溶解。

粗酶液提取：

按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿。16000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。

AAO測定操作：

1. 分光光度計預熱30 min，調節波長到265 nm，蒸餾水調零。

2. 試劑二在25℃水浴鍋中預熱30 min。

3. 依次在1 mL石英比色皿中加入100μL上清液、850μL預熱的試劑二和50μL試劑三，迅速混勻后在265nm測定10 s和130 s光吸收A1和A2，△A =A1-A2。

AAO活性計算公式：

(1). 按蛋白濃度計算

AAO活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol AsA 為1個酶活單位。

AAO(nmol/min /mg prot) = △A÷(ε×d）×V反總×109÷(Cpr×V樣)÷T

= 92.4×△A÷Cpr

(2). 按樣本質量計算

AAO活性單位定義：25℃中每克樣本每分鐘氧化1nmol AsA 為1個酶活單位。

AAO(nmol/min/g鮮重) = △A÷(ε×d）×V反總×109÷(W×V樣÷V樣總)÷T

= 92.4×△A÷W

ε：AsA在265nm處摩爾吸光系數為5.42×104 L/mol/cm；d：比色皿光徑（cm），1 cm；V反總：反應體系總體積（L），1000μL=1×10-3 L；106：1mol=1×109nmol；Cpr：上清液蛋白質濃度（mg/mL），需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質含量測定試劑盒；V樣：加入反應體系中上清液體積（mL），100μL=0.1 mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；W，樣本質量，g；T：催化反應時間（min），2min。

注意事項:

配制好的試劑放在4℃保存，三天內使用完。

注意：

1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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