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取帶蓋試管，進入精確稱取50℃烘干至恒重的約0.1 g組織，加濃硫酸1.0 mL，蓋緊（防止水分散失）后沸水浴10min左右，待溶液呈黑色或棕色時取出。稍冷后，加試劑一200μL，充分混勻，蓋緊后繼續(xù)沸水浴，直到溶液呈透明狀，取出室溫冷卻后，加蒸餾水8.8 mL，充分混勻；室溫，8000g，離心10min，取上清液待測。

測定操作：

1. 分光光度計預熱30 min，調節(jié)波長到660 nm，蒸餾水調零。

2. 打開水浴鍋，調節(jié)溫度到40℃。

3. 空白管：取EP管，依次加入500μL蒸餾水，500μL試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度，記為A空白管。

4. 標準管：取EP管，依次加入50μL標準液，450μL蒸餾水，500μL試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度，記為A標準管。

5. 測定管：取EP管，依次加入50μL上清液，450μL蒸餾水，500μL試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度，記為A測定管。

注意：空白管和標準管只需測定一次。

組織總磷含量計算公式：

（1）按照蛋白含量計算

總磷含量(mmol/mg prot) = [C標準液×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)]×V總÷Cpr

= 1×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)÷W

（2）按照樣本質量計算

總磷含量(mmol/g 干重)= [C標準液×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)]×V總÷W

= 1×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)÷W

C標準液：1 mmol/L；V總：上清液總體積，10 mL=0.01 L；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣品質量，g。

注意事項：

1.試劑三需臨用前配制，并且當天使用完畢。

2.40min內完成比色。

3.最低檢出限為10μmol/L。

注意：

1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術有限公司

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