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標簽:組織總磷含量測定試劑盒
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產品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
組織總磷含量測定試劑盒 | 分光光度法 | 50管/48樣 | CS-01S63265 |
磷的存在形態(tài)包括無機磷與有機磷。無機磷主要指磷酸根,參與生物體內多種代謝,包括能量代謝、核酸代謝、蛋白質磷酸化和脫磷酸化等。通過測定總磷與無機磷含量即可了解作物對磷的利用率,進而為合理施肥提供依據。
測定原理:
總磷經消化后,轉化成無機磷。鉬藍法是測定無機磷含量的經典方法,一定條件下,鉬藍與磷酸根生成660nm有特征吸收峰的物質,通過測定660nm光吸收,即可計算無機磷含 量,進而可計算出組織中總磷含量。
自備儀器和用品:
可見分光光度計、離心機、水浴鍋、可調式移液槍、1ml玻璃比色皿、蒸餾水和濃硫酸。
試劑組成和配置:
試劑一:液體×1瓶,4℃保存(強腐蝕性,強氧化性)。
試劑二:液體×1瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1瓶,4℃避光保存。臨用前配制,加入15 mL蒸餾水,溶解后再加入10 mL試劑二,混勻。
標準品:液體×1支,-20℃保存。
有機磷消化:
取帶蓋試管,進入精確稱取50℃烘干至恒重的約0.1 g組織,加濃硫酸1.0 mL,蓋緊(防止水分散失)后沸水浴10min左右,待溶液呈黑色或棕色時取出。稍冷后,加試劑一200μL,充分混勻,蓋緊后繼續(xù)沸水浴,直到溶液呈透明狀,取出室溫冷卻后,加蒸餾水8.8 mL,充分混勻;室溫,8000g,離心10min,取上清液待測。
測定操作:
1. 分光光度計預熱30 min,調節(jié)波長到660 nm,蒸餾水調零。
2. 打開水浴鍋,調節(jié)溫度到40℃。
3. 空白管:取EP管,依次加入500μL蒸餾水,500μL試劑三,混勻后置于40℃水浴保溫10min,室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度,記為A空白管。
4. 標準管:取EP管,依次加入50μL標準液,450μL蒸餾水,500μL試劑三,混勻后置于40℃水浴保溫10min,室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度,記為A標準管。
5. 測定管:取EP管,依次加入50μL上清液,450μL蒸餾水,500μL試劑三,混勻后置于40℃水浴保溫10min,室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度,記為A測定管。
注意:空白管和標準管只需測定一次。
組織總磷含量計算公式:
(1)按照蛋白含量計算
總磷含量(mmol/mg prot) = [C標準液×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)]×V總÷Cpr
= 1×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)÷W
(2)按照樣本質量計算
總磷含量(mmol/g 干重)= [C標準液×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)]×V總÷W
= 1×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)÷W
C標準液:1 mmol/L;V總:上清液總體積,10 mL=0.01 L;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣品質量,g。
注意事項:
1.試劑三需臨用前配制,并且當天使用完畢。
2.40min內完成比色。
3.最低檢出限為10μmol/L。
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術有限公司
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1、報價含普票、運費。
2、常用試劑備貨充足,除對溫度要求極其嚴格的產品當天可發(fā)貨。
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