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丙酮酸脫氫酶（Pyruvate dehydrogenase，PDH）試劑盒分光光度法50管/48樣

  • 產品貨號：CS-01Ｓ63288
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：進口、國產
  • 包裝類型:50管/48樣
  • 采購熱度：280
  • 庫存：32
  • CAS號：
  • 方法：分光光度法
  • 含量：
  • 品牌名稱:莼試
  • 分子式：
  • 分子量：

簡介內容：丙酮酸脫氫酶（Pyruvate dehydrogenase，PDH）試劑盒質量可靠、價格優惠、效果穩定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點。

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標簽:丙酮酸脫氫酶（Pyruvate dehydrogenase PDH）試劑盒 

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產品名稱

檢測方法

規格

貨號

丙酮酸脫氫酶（Pyruvate dehydrogenase，PDH）試劑盒

分光光度法

50管/48樣

CS-01Ｓ63288
 注意：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：

PDH（EC 1.2.4.1）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，是丙酮酸脫氫酶復合體(PDHC)催化丙酮酸氧化脫羧的限速酶，催化丙酮酸脫梭生成羥乙基-TPP，把糖酵解和三羧酸循環連接起來。

商品介紹：

測定原理

PDH催化丙酮酸脫氫，同時還原2,6-二氯酚靛酚（2,6-DCPIP），從而導致600nm光吸收的減少。

需自備的儀器和用品

可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制

試劑一：50mL×1瓶，-20℃保存；

試劑二：10mL×1瓶，-20℃保存；

試劑三：1mL×1支，-20℃保存；

試劑四：液體50mL×1瓶，4℃保存；

試劑五：粉劑×1支，4℃保存；

試劑六：粉劑×1支，4℃保存；

試劑七：粉劑×1支，4℃保存；

試劑八：粉劑×1支，4℃保存;

工作液的配制：臨用前把試劑五、試劑六、試劑七和試劑八轉移到試劑四中混合溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

樣本的前處理

組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：

1、稱取約0.1g組織或收集500萬細菌或細胞，加入1mL試劑一和10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。

2、將勻漿600g，4℃離心5min。

3、棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心10min。

4、上清液即胞漿提取物，可用于測定從線粒體泄漏的PDH（此步可選做）。

5、在步驟④的沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3秒，間隔10秒，重復30次），用于線粒體PDH活性測定。

測定步驟

1、分光光度計預熱30min以上，調節波長至605nm處，蒸餾水調零。

2、工作液于37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）中孵育5min。

3、在1mL玻璃比色皿中加入50μL樣本和900μL工作液，混勻，立即記錄605nm處初始吸光值A1和1min后的吸光值A2，計算ΔA=A1-A2。

PDH活性計算

（1） 按樣本蛋白濃度計算

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。

PDH活性（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=905×ΔA÷Cpr

（2） 按樣本鮮重計算

單位的定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。

PDH活性（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=182.8×ΔA÷W

（3） 按細菌或細胞密度計算

單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。

PDH活性（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=0.366×ΔA

V反總：反應體系總體積，9.5×10-4 L；ε：2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數，2.1×104 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.05 mL；V樣總：加入提取液體積，0.202 mL；T：反應時間，1 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬。

注意：
1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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訂貨流程

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1、報價含普票、運費。

 

2、常用試劑備貨充足，除對溫度要求極其嚴格的產品當天可發貨。

  

3、進口原裝產品要3-6周的貨期，詳細情況請咨詢客服。

  

4、訂貨時間為工作日每周一至周五16:00之前。

  

5、如需代為檢測，標本對環境溫度高，可聯系客服安排專人取樣（限省內客戶）。

  

6、代測免收代測費，一周出結果。

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