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α-酮戊二酸脫氫酶（α-KGDH）活性測定試劑盒分光光度法50管/48樣

  • 產品貨號：CS-01Ｓ63289
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：進口、國產
  • 包裝類型:50管/48樣
  • 采購熱度：275
  • 庫存：31
  • CAS號：
  • 方法：分光光度法
  • 含量：
  • 品牌名稱:莼試
  • 分子式：
  • 分子量：

簡介內容：α-酮戊二酸脫氫酶（α-KGDH）活性測定試劑盒質量可靠、價格優惠、效果穩定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點。

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標簽:α-酮戊二酸脫氫酶（α-KGDH）活性測定試劑盒 

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產品名稱

檢測方法

規格

貨號

α-酮戊二酸脫氫酶（α-KGDH）活性測定試劑盒

分光光度法

50管/48樣

CS-01Ｓ63289
 注意：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：

α-KGDH（EC 1.2.4.2）廣泛存在于動物、植物微生物和培養細胞的線粒體中，是三羧酸循環調控關鍵酶之一，催化α-酮戊二酸氧化脫羧生成琥珀酰輔酶A。

商品介紹：

測定原理

α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+ 和輔酶A生成琥珀酰輔酶A、 二氧化碳和 NADH，NADH在340 nm有特征吸收峰，以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。

需自備的儀器和用品

紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制

試劑一：50mL×1瓶，-20℃保存；

試劑二：10mL×1瓶，-20℃保存；

試劑三：1mL×1支，-20℃保存；

試劑四：液體55.5mL×1瓶，4℃保存；

試劑五：粉劑×1支，4℃保存；

試劑六：粉劑×1支，4℃保存；

試劑七：粉劑×1支，4℃保存;

試劑八：粉劑×1支，4℃保存;

試劑九：粉劑×1支，-20℃保存;

試劑十：粉劑×1支，-20℃保存；臨用前加入2.1mL蒸餾水充分混勻待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

工作液的配制：臨用前把試劑五、試劑六、試劑七、試劑八和試劑九轉移到試劑四中混合溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

樣本的前處理：

組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：

1、稱取約0.1g組織或收集500萬細菌或細胞，加入1mL試劑一和10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。

2、將勻漿600g，4℃離心5min。

3、棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心10min。

4、上清液即胞漿提取物，可用于測定從線粒體泄漏的α-KGDH（此步可選做）。

5、在步驟④的沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3秒，間隔10秒，重復30次），用于線粒體α-KGDH活性測定。

測定步驟

1、分光光度計預熱30min以上，調節波長至340nm處，蒸餾水調零。

2、工作液于37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）孵育5min。

3、在1mL石英比色皿中依次加入40μL試劑十、60μL樣本和1.1mL工作液，混勻，立即記錄340nm處20s的吸光值A1和2min20s時的吸光值A2，計算ΔA=A2-A1。

α-KGDH活性計算

（1） 按樣本蛋白濃度計算

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

α-KGDH活性（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr

（2） 按樣本鮮重計算：

單位的定義：每g組織在反應體系中每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

α-KGDH（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=325×ΔA÷W

（3） 按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

α-KGDH活性（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=0.65×ΔA

V反總：反應體系總體積，1.2×10-3 L；ε：NADH摩爾消光系數，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.06 mL；V樣總：加入提取液體積，0.202 mL；T：反應時間，2min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬。

注意：
1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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1、報價含普票、運費。

 

2、常用試劑備貨充足，除對溫度要求極其嚴格的產品當天可發貨。

  

3、進口原裝產品要3-6周的貨期，詳細情況請咨詢客服。

  

4、訂貨時間為工作日每周一至周五16:00之前。

  

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賬 戶 名：上海生物

 

開 戶 行：中國銀行山東省分行營業部

  

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