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線粒體異檸檬酸脫氫酶（ICDHm）活性測定試劑盒分光光度法50管/48樣

  • 產品貨號：CS-01Ｓ63284
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：進口、國產
  • 包裝類型:50管/48樣
  • 采購熱度：291
  • 庫存：29
  • CAS號：
  • 方法：分光光度法
  • 含量：
  • 品牌名稱:莼試
  • 分子式：
  • 分子量：

簡介內容：線粒體異檸檬酸脫氫酶（ICDHm）活性測定試劑盒質量可靠、價格優惠、效果穩定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點。

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標簽:線粒體異檸檬酸脫氫酶（ICDHm）活性測定試劑盒 

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產品名稱

檢測方法

規格

貨號

線粒體異檸檬酸脫氫酶（ICDHm）活性測定試劑盒

分光光度法

50管/48樣

CS-01Ｓ63284
 注意：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
ICDHm（EC 1.1.1.41）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞的線粒體中，在三羧酸循中催化異檸檬酸生成α-酮戊二酸，同時將NAD+ 還原為NADH，是三羧酸循環的限速酶之一，其催化的反應是細胞NADH主要來源之一。
商品介紹：

測定原理

ICDHm催化NAD+ 還原生成NADH，導致340nm處光吸收上升。

需自備的儀器和用品

紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制

試劑一：50mL×1瓶，-20℃保存；

試劑二：10mL×1瓶，-20℃保存；

試劑三：1mL×1支，-20℃保存；

試劑四：液體60mL×1瓶，4℃保存；

試劑五：粉劑×1支，4℃保存；

試劑六：粉劑×1支，-20℃保存；

試劑七：粉劑×1支，-20℃保存; 臨用前加入3mL蒸餾水充分混勻待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

工作液的配制：臨用前把試劑五、試劑六轉移到試劑四中混合溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

樣本的前處理：

組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：

1、稱取約0.1g組織或收集500萬細菌或細胞，加入1mL試劑一和10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。

2、將勻漿600g，4℃離心5min。

3、棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心10min。

4、上清液即胞漿提取物，可用于測定從線粒體泄漏的ICDHm（此步可選做）。

5、在步驟④的沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3秒，間隔10秒，重復30次），用于線粒體ICDHm活性測定。

測定步驟

1、分光光度計預熱30min以上，調節波長至340nm處，蒸餾水調零。

2、工作液于 37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）孵育5min。

3、在1mL石英比色皿中依次加入60μL試劑七、80μL樣本和1mL工作液，混勻，立即記錄340nm處20s時的吸光值A1和2min20s時的吸光值A2，計算ΔA=A2-A1。

ICDHm活性計算

（1） 按樣本蛋白濃度計算

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個酶活性單位。

ICDHm活性（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V樣) ÷T=1145×ΔA÷Cpr

（2） 按樣本鮮重計算

單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個酶活性單位。

ICDHm（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=231.3×ΔA÷W

（3） 按細菌或細胞密度計算

單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個酶活性單位。

ICDHm活性（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=0.463×ΔA

V反總：反應體系總體積，1.14×10-3 L；ε：NADH摩爾消光系數，6.22×103L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.08 mL；V樣總：加入提取液體積，0.202 mL；T：反應時間，2min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬。

注意：
1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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1、報價含普票、運費。

 

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4、訂貨時間為工作日每周一至周五16:00之前。

  

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