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檸檬酸合酶（citrate synthase，CS）試劑盒分光光度法50管/24樣

  • 產品貨號：CS-01Ｓ63286
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：進口、國產
  • 包裝類型:50管/24樣
  • 采購熱度：258
  • 庫存：27
  • CAS號：
  • 方法：分光光度法
  • 含量：
  • 品牌名稱:莼試
  • 分子式：
  • 分子量：

簡介內容：檸檬酸合酶（citrate synthase，CS）試劑盒質量可靠、價格優(yōu)惠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點。

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標簽:檸檬酸合酶（citrate synthase CS）試劑盒 

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產品名稱

檢測方法

規(guī)格

貨號

檸檬酸合酶（citrate synthase，CS）試劑盒

分光光度法

50管/24樣

CS-01Ｓ63286
 注意：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：

CS（EC 2.3.3.1）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞的線粒體基質中，是三羧酸循環(huán)第一個限速酶，是三羧酸循環(huán)主要調控位點之一。

商品介紹：

測定原理：

CS催化乙酰CoA和草酰乙酸產生檸檬酰輔酶A，進一步水解產生檸檬酸；該反應促使無色的DTNB轉變成黃色的TNB，在 412nm處有特征吸光值。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰、無水乙醇和蒸餾水

試劑組成和配制：

試劑一：液體50mL×1瓶，-20℃保存；

試劑二：液體10mL×1瓶，-20℃保存；

試劑三：液體1mL×1支，-20℃保存；

試劑四：液體55mL×1瓶，4℃保存；

試劑五：粉劑×1瓶，4℃保存；

試劑六：粉劑×1支，-20℃保存，臨用前加入2.4mL蒸餾水，用不完的試劑仍-20℃保存；

樣本的前處理：

組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：

①稱取約0.1g組織或收集500萬細胞，加入1mL試劑一和10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。

②將勻漿600g，4℃離心5min。

③棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心10min。

④上清液即胞漿提取物，可用于測定從線粒體泄漏的CS（此步可選做）。

⑤在步驟④的沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3秒，間隔10秒，重復30次），用于線粒體CS測定。

測定步驟：

1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節(jié)波長至412nm，蒸餾水調零。

2、樣本測定

（1）在試劑五中加入1.2mL無水乙醇和26mL試劑四，混勻，37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）孵育5min；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融；

（2）測定管：在EP管中加入40μL樣本、880μL試劑五和40μL試劑六，混勻，37℃反應15min后立即測定吸光值A1。

（3）對照管：在EP管中加入40μL樣本、880μL試劑四和40μL試劑六，混勻，37℃反應15min后立即測定吸光值A2。

（4）計算ΔA=A1-A2，每個測定管設一個對照管。

CS活性計算：

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產生1 nmol TNB定義為一個酶活力單位。

CS（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=117.6×ΔA÷Cpr

此法需要自行測定樣本蛋白質濃度。

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義：每g組織每分鐘催化產生1 nmol TNB定義為一個酶活力單位。

CS（nmol/min /g 鮮重）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W× V樣÷V樣總）÷T=23.8×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產生1 nmol TNB定義為一個酶活力單位。

CS（nmol/min /104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（500×V樣÷V樣總）÷T=0.0475×ΔA

V反總：反應體系總體積，9.6×10-4 L；ε：TNB摩爾消光系數，1.36×104 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.04 mL；V樣總：加入提取液體積，0.202 mL；T：反應時間，15 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細胞或細菌總數，500萬。

注意：
1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術有限公司

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