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| 產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 乙酸激酶（acetate kinase，ACK）試劑盒 | 分光光度法 | 50管/48樣 | CS-01Ｓ63274 |
ACK主要存在于微生物中，催化乙酸和ATP生成乙酰磷酸和ADP，是細菌碳代謝和能量代謝的關(guān)鍵酶，尤其是在古細菌甲烷合成代謝中起著中樞作用。
測定原理：
（1）ACK催化乙酸鈉和ATP生成乙酰磷酸和ADP，（2）丙酮酸激酶催化ADP和PEP生成ATP和丙酮酸，（3）乳酸脫氫酶催化丙酮酸和NADH生成乳酸和NAD+，（4）在340nm下測定NADH氧化生成NAD+速率，即可反映ACK活性。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水
試劑組成和配制：
提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體60mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×2瓶，-20℃保存；
試劑三：液體1.2mL×1支，4℃保存；
樣本的前處理：
1、細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
測定步驟：
1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測定
（1）工作液的配置：臨用前取試劑二一瓶，加入25mL試劑一和500μL試劑三，充分混合溶解，置于37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴5min；現(xiàn)配現(xiàn)用；
（2）在1mL石英比色皿中加入100μL樣本和900μL工作液，混勻，立即記錄340nm處20s時的吸光值A1和 3min20s后的吸光值A2，計算ΔA=A1-A2。
ACK活性計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
ACK（nmol/min /mg prot）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=536×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
ACK（nmol/min /g 鮮重）= [ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=536×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
ACK（nmol/min /104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=1.072×ΔA
V反總：反應體系總體積，1×10-3 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.1 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，3 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500萬。
原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司
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