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產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
高鐵還原酶(ferric-chelate reductase,FCR)試劑盒 | 分光光度法 | 50管/48樣 | CS-01S63279 |
高鐵還原酶(ferric-chelate reductase,FCR)催化高價鐵螯合物中的Fe3+還原為Fe2+,在部分物種鐵元素的吸收中有重要作用。
測定原理:
FCR催化Fe3+還原為Fe2+,Fe2+和ferrozine反應顯色,在562nm下有特征吸光值。
自備用品:
可見分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體15mL×1瓶,4℃避光保存;
試劑二:液體15mL×1瓶,4℃避光保存;
試劑三:液體15mL×1瓶,4℃保存。
粗酶液提取:
按照組織質量(g):水mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL蒸餾水),進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
測定步驟:
1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至562nm,蒸餾水調零。
2、工作液配制:將試劑一、二、三以1:1:1的比例混合。臨用前配制,用多少配多少
3、在1mL玻璃比色皿中,加入250μL樣本上清和750μL工作液,混勻,記錄初始吸光值A1和30min后的吸光值A2。ΔA=A2-A1。
FCR活性計算公式:
標準曲線:y = 8.0014x + 0.0011,R2 = 0.9997;
(1)按樣本質量計算
單位定義:每g樣本每分鐘產生1nmolFe2+-ferrozine定義為一個酶活力單位。
FCR(nmol/min/g 鮮重)=(△A-0.0011)÷ 8.0014×1000×V標÷(V樣÷V樣總×W)÷T
= 4.166×(△A-0.0011)÷W
(2)按樣本蛋白濃度計算
單位定義:每mg蛋白每分鐘產生1nmolFe2+-ferrozine定義為一個酶活力單位。
FCR(nmol/min/mg prot)=(△A-0.0011)÷8.0014×1000×V標÷(V樣÷V樣總×Cpr)÷T
=4.166×(△A-0.0011)÷Cpr
V樣總:加入提取液體積,1 mL;V樣:反應中樣品體積,250μL;V標:加入標準品體積 ,250μL;T:反應時間,30min;W:樣品質量,g;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;1000,μmol到nmol的轉換系數。
原創作者:上海莼試生物技術有限公司
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