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1、細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

3、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟：

1、分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。

2、工作液的配制：臨用前將試劑二、試劑三和試劑四轉(zhuǎn)移到試劑一中混合溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

3、將工作液置于37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)預(yù)熱5分鐘。

4、在1mL石英比色皿中加入50μL樣本和950μL工作液，立即混勻，記錄340nm處初始吸光值A1和 2min后的吸光值A2，計算ΔA=A2-A1。

注意：在該試劑盒中，若ΔA大于0.3，需將樣本用提取液稀釋適當(dāng)倍數(shù)后測定，使ΔA小于0.3可提高檢測靈敏度。計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

G6P活性計算：

1、血清（漿）G6P活力計算

單位定義：每毫升血清（漿）每分鐘生成1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。

G6P（nmol/min/mL））＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=1608×ΔA

2、組織、細菌或細胞中G6P活力計算

（1）按樣本蛋白濃度計算

單位定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1nmol NADH定義為一個酶活力單位。

G6P（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算

單位定義：每g組織每分鐘生成1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。

G6P（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總)÷T=1608×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘生成1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。

G6P（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=3.215×ΔA

V反總：反應(yīng)體系總體積，1×10-3 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.05 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間，2 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500萬。

注意：

1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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