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產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
海藻糖含量試劑盒 | 分光光度法 | 50管/48樣 | CS-01S63294 |
海藻糖廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中。由于海藻糖具有獨特的不同于其他碳水化合物的生物學特性,能在干旱、高溫、脫水、冷凍、高滲透壓及毒性物質等惡劣環境下保護生物體細胞蛋白質、脂肪、糖類、核酸等組分不受損害。
測定原理:
蒽酮比色法。具有靈敏度高﹑簡便快捷﹑適用于微量樣品的測定等優點。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿﹑研缽、濃硫酸(不允許快遞)和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:液體 50ml×1瓶,4℃保存;
試劑一:粉劑×1瓶,4℃保存;
海藻糖提取:
1、細菌或細胞處理:收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3S,間隔10S,重復30次),室溫靜置45min,振蕩3~5次,冷卻后,8000g,25℃離心10min,取上清。
2、組織的處理:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),冰浴勻漿,室溫靜置45min,振蕩3~5次,冷卻后,8000g,25℃離心10min,取上清。
3、血清(漿)的處理:按照血清(漿)體積(mL):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議取0.1mL血清(漿)加入1mL提取液),冰浴勻漿,室溫靜置45min,振蕩3~5次,冷卻后,8000g,25℃離心10min,取上清。
測定步驟:
1、分光光度計預熱30min以上,調節波長至620nm,蒸餾水調零。
2、調節水浴鍋至95度。
3、工作液的配制:臨用前在試劑一中加入7.5mL蒸餾水后,緩慢加入42.5mL濃硫酸,不斷攪拌,充分溶解,待用;用不完的試劑4℃保存一周;
4、樣本測定:取0.25mL樣本和1mL工作液至EP管中,95度水浴10 min(蓋緊,防止水分散失),自然冷卻至室溫,在620 nm 波長下記錄測定吸光度值A。
注意:由于工作液具有強腐蝕性,請謹慎操作。
若吸光值大于1,請將樣本用提取液稀釋后再測定,計算公式中乘以相應的稀釋倍數。
海藻糖含量計算:
1、標準條件下測定回歸方程為y = 8.8976x+0.0729;x為標準品濃度(mg/mL),y為吸光值。
2、按樣本鮮重計算:
海藻糖含量(mg/g 鮮重)= [V1×(A -0.0729)÷8.8976]÷(W×V1÷V2)=0.112×(A -0.0729) ÷W。
3、按樣本蛋白濃度計算:
海藻糖含量(mg/mg prot)=[ V1×(A -0.0729) ÷8.8976]÷(V1×Cpr)=0.112×(A -0.0729) ÷Cpr。
4、按細菌或細胞密度計算:
海藻糖含量(μg/104 cell)=[1000×V1×(A -0.0729) ÷8.8976]÷(500×V1÷V2)=0.224×(A -0.0729)
5、血清(漿)海藻糖含量計算
海藻糖含量(mg/mL)=[V1×(A -0.0729)÷8.8976 )]÷(V3×V1÷V2)=1.12×(A -0.0729)
1000:1mg/mL=1000μg/mL;V1:加入反應體系中樣本體積,0.25 mL;V2:加入提取液總體積1mL;V3:加入血清(漿體積),0.1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;500:細菌或細胞總數,500萬。
注意:最低檢測限為10μg/g鮮重或0.1μg/ mg prot
原創作者:上海莼試生物技術有限公司
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