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1、細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次），靜置30min， 8000g，25℃離心10min，取上清待測。

2、組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿，靜置30min，8000g，25℃離心10min，取上清待測。

3、血清（漿）樣品：按照血清（漿）體積（mL）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議取0.1mL血清（漿）加入1mL提取液），進行冰浴勻漿，靜置30min， 8000g，25℃離心10min，取上清待測。

測定步驟：

1、分光光度計預熱30min以上，調節波長至520nm，蒸餾水調零。

2、取300μL樣本+100μL試劑一于1.5mL EP管中，混勻，靜置2min，加入500μL試劑二，混勻，于520nm波長處測定管吸光值A。

丙酮酸含量計算：

1、標準條件下測定回歸方程為y = 0.0466x + 0.0675； x為丙酮酸含量（μg/mL），y為吸光值。

2、按照血清（漿）體積計算

丙酮酸含量（μg/mL）= [(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷（V3×V1÷V2）=214.6×(A-0.0675)

3、按照蛋白濃度計算

丙酮酸含量（μg/mg prot）=[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(V1×Cpr)=21.46×(A-0.0675) ÷Cpr

4、按照樣品質量計算

丙酮酸含量（μg/g鮮重）= [(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(W ×V1÷V2）=21.46×(A-0.0675) ÷W

3、按照細菌或細胞密度計算

丙酮酸含量（μg/104 cell）＝[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷（500×V1÷V2）=0.043×(A-0.0675)

V1：加入反應體系中樣本體積，0.3mL；V2：加入提取液體積，1 mL；V3：加入血清（漿）體積，0.1 mL； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬。

注意：最低檢測限為1μg/mL或1μg/g鮮重或10ng/mg prot

注意：

1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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