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②胞漿和葉綠體TPI酶的分離：按照植物組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5～10的比例（建議稱取約0.1g樣本，加入1mL提取液一），冰浴勻漿后于4℃，200g離心5min，棄沉淀，取上清在4℃，8000g離心10min，取上清用于測定胞漿TPI酶活性，取沉淀加1mL提取液二，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇7s，總時間1min），然后4℃，8000g離心10min，取上清測定葉綠體中TPI酶活性。

建議測定總TPI酶活性，按照步驟①提取粗酶液，若需要分別測定胞漿和葉綠體中的TPI，則按照步驟②提取粗酶液。

測定操作

1.分光光度計預熱30min，調節波長至340nm，蒸餾水調零。

2.取1mL石英比色皿，依次加入600μL試劑一，100μL試劑二，100μL試劑三，100μL試劑四，100μL粗酶液，充分混勻，記錄340nm處10s的吸光值A1和310s的吸光值A2，△A=A2-A1

計算公式

（1）按照樣本蛋白濃度計算

酶活單位定義：每毫克組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

TPI（nmol/min /mg prot）= ΔA÷（ε×d）×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr

（2）按照樣本質量計算

酶活單位定義：每克組織每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

TPI（nmol/min /g 鮮重）= ΔA÷（ε×d）×V反總÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.54×ΔA÷W

V反總：反應體系總體積，1mL；ε：NADH摩爾消光系數，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.1mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g

注意：

1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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