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3-磷酸甘油醛脫氫酶(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)試劑

  • 產品貨號：CS-01Ｓ63301
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：進口、國產
  • 包裝類型:50管/48樣
  • 采購熱度：401
  • 庫存：30
  • CAS號：
  • 方法：分光光度法
  • 含量：
  • 品牌名稱:莼試
  • 分子式：
  • 分子量：

簡介內容：3-磷酸甘油醛脫氫酶(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)試劑盒質量可靠、價格優惠、效果穩定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點。

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標簽:3-磷酸甘油醛脫氫酶(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase GAPDH)試劑盒 

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產品名稱

檢測方法

規格

貨號

3-磷酸甘油醛脫氫酶(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)試劑盒

分光光度法

50管/48樣

CS-01Ｓ63301
 注意：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：

GAPDH催化3-磷酸甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油酸，是糖酵解途徑的關鍵酶，與糖異生途徑、體內血糖濃度的維持和糖尿病的發生密切相關，在機體糖、脂、蛋白代謝紊亂疾病中發揮重要作用。

商品介紹：

測定原理

3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和ATP生成1,3二磷酸甘油酸。GAPDH逆向催化1,3二磷酸甘油酸和NADH生成3磷酸甘油醛、無機磷和NAD，340nm處測定NADH的減少量可反映GADPH活性的高低。

需自備的儀器和用品

分光光度計、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制

提取液一：液體50mL×1瓶，4℃保存。

提取液二：液體50mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：粉劑×1瓶，-20℃保存；

試劑二：液體50mL×1瓶，4℃保存；

試劑三：液體28μL×1支，4℃保存；

組織樣本的前處理

①總GAPDH酶提取：建議稱取約0.1g樣本，加入1mL提取液一，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇7s，總時間1min），然后4℃，8000g離心10min，取上清測定。

②胞漿和葉綠體GAPDH酶的分離：按照植物組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5～10的比例（建議稱取約0.1g樣本，加入1mL提取液一），冰浴勻漿后于4℃，200g離心5min，棄沉淀，取上清在4℃，8000g離心10min，取上清用于測定胞漿GAPDH酶活性，取沉淀加1mL提取液二，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇7s，總時間1min），然后4℃，8000g離心10min，取上清測定葉綠體中GAPDH酶活性。

建議測定總GAPDH酶活性，按照步驟①提取粗酶液，若需要分別測定胞漿和葉綠體中的GAPDH，則按照步驟②提取粗酶液。

細菌或培養細胞的前處理

先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：提取液一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液一），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟

1、分光光度計預熱30min以上，調節波長至340nm，蒸餾水調零。

2、樣本測定

（1）工作液的配制：將試劑二全部倒入試劑一瓶中，充分溶解，37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)預熱10分鐘；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

（2）在試劑三中加入1mL蒸餾水，充分混勻待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

（3）在1mL石英比色皿中加入30μL樣本、20μL試劑三和950μL工作液，混勻，加入最后一個試劑的同時開始計時，記錄340nm處20s時的吸光值A1和 5min20s后的吸光值A2，計算ΔA=A1-A2。

GAPDH活性計算

（1）按樣本蛋白濃度計算

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

GAPDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=1072×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算

單位的定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

GAPDH（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=1072×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算

單位的定義：每一萬個細菌或細胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

GAPDH（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500 ×V樣÷V樣總) ÷T=2.144×ΔA

V反總：反應體系總體積，1×10-3 L；ε：NADH摩爾消光系數，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.03 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬。

注意：
1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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訂貨流程

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1、報價含普票、運費。

 

2、常用試劑備貨充足，除對溫度要求極其嚴格的產品當天可發貨。

  

3、進口原裝產品要3-6周的貨期，詳細情況請咨詢客服。

  

4、訂貨時間為工作日每周一至周五16:00之前。

  

5、如需代為檢測，標本對環境溫度高，可聯系客服安排專人取樣（限省內客戶）。

  

6、代測免收代測費，一周出結果。

7、產品因運輸途中包裝破損請拒絕簽收，做退回。我們將在24小時之內為您補發 損壞產品。

8、如因單位財務制度原因，可申請先發貨，報賬后付款（此條款僅限醫院、學校信譽良好客戶）。

付款方式

普票匯款信息

  

賬 戶 名：上海生物

 

開 戶 行：中國銀行山東省分行營業部

  

賬 號：2169 2341 6278

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