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細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟

1、分光光度計預熱30min以上，調節波長至412nm，蒸餾水調零。

2、在1 mL玻璃比色皿中加入125μL試劑一、125μL試劑二和250μL試劑三，混勻，加入500μL樣本上清，迅速混勻后記錄412nm下初始吸光值A1和4min后的吸光值A2。計算ΔA＝A2-A1。

HMGCS活性計算

1、血清（漿）活性

單位定義：每mL血清（漿）每分鐘催化產生1nmolTNB為一個酶活力單位。

HMGCS（nmol/min /mL）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣 ÷T=36.76×ΔA

2、組織、細菌或細胞HMGCS活性

(1) 按樣本蛋白濃度計算

單位定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產生1nmolTNB為一個酶活力單位。

HMGCS（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=36.76×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算

單位定義：每g組織每分鐘催化產生1nmolTNB為一個酶活力單位。

HMGCS（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W ×V樣÷V樣總）÷T=36.76×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算

單位定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產生1nmolTNB為一個酶活力單位。

HMGCS（nmol/min /104 cel）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（500×V樣÷V樣總）÷T=0.074×ΔA

V反總：反應體系總體積，1×10-3 L；ε：TNB摩爾消光系數，1.36×104 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.5 mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應時間，4 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細胞或細菌總數，500萬。

注意：

1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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