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線粒體復合體Ⅲ試劑盒分光光度法25管/24樣

  • 產品貨號：CS-01Ｓ63324
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：進口、國產
  • 包裝類型:25管/24樣
  • 采購熱度：290
  • 庫存：48
  • CAS號：
  • 方法：分光光度法
  • 含量：
  • 品牌名稱:莼試
  • 分子式：
  • 分子量：

簡介內容：線粒體復合體Ⅲ試劑盒質量可靠、價格優惠、效果穩定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點。

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標簽:線粒體復合體Ⅲ試劑盒 

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產品名稱

檢測方法

規格

貨號

線粒體復合體Ⅲ試劑盒

分光光度法

25管/24樣

CS-01Ｓ63324
 注意：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：

線粒體復合體Ⅲ（EC 1.10.2.2）又稱CoQ-細胞色素C還原酶，廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞的線粒體中，是線粒體呼吸電子傳遞鏈主路和支路的共有成分，負責把還原型CoQ的氫傳遞給細胞色素C，生成還原型細胞色素C。

商品介紹：

測定原理

與氧化型細胞色素C不同，還原型細胞色素C在550nm有特征光吸收，因此550nm光吸收增加速率能夠反映線粒體復合體Ⅲ酶活性。

需自備的儀器和用品

可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制

試劑一：25mL×1瓶，-20℃保存；

試劑二：5mL×1瓶，-20℃保存；

試劑三：0.5 mL×1支，-20℃保存；

試劑四：液體20mL×1瓶，4℃保存；

試劑五：粉劑×1支，-20℃保存；

試劑六：液體2.5mL×1瓶，-20℃保存；

樣本的前處理：

組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：

1、準確稱取0.1g組織或收集500萬細菌或細胞，加入1mL試劑一和10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。

2、將勻漿600g，4℃離心5min。

3、棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心10min。

4、上清液即為除去線粒體的胞漿蛋白，可用于測定從線粒體泄漏的復合體Ⅲ（此步可選做）。

5、步驟④中的沉淀即為線粒體，加入200uL試劑二和2uL 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10秒，重復30次），用于復合體Ⅲ酶活性測定。

測定步驟：

1、分光光度計預熱30min以上，調節波長至550nm，蒸餾水調零。

2、樣本測定

（1）工作液的配制：臨用前把試劑五轉移到試劑四中混合溶解，置于37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）孵育5min；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

（2）在1mL玻璃比色皿中加入40μL樣本、100μL試劑六和800μL工作液，立即混勻，記錄550nm處初始吸光值A1和 2min后的吸光值A2，計算ΔA=A2-A1。

復合體Ⅲ活力單位的計算：

（1） 按樣本蛋白濃度計算

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產生1 nmol 還原型細胞色素C定義為一個酶活力單位。

復合體Ⅲ活力(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V樣) ÷T=615×ΔA÷Cpr

此法需要自行測定樣本蛋白質濃度。

（2） 按樣本鮮重計算

單位的定義：每g組織每分鐘催化產生1nmol 還原型細胞色素C定義為一個酶活力單位。

復合體Ⅲ活力(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=124×ΔA÷W

（3） 按細菌或細胞密度計算

單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產生1nmol還原型細胞色素C定義為一個酶活力單位。

復合體Ⅲ活力(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=0.248×ΔA

V反總：反應體系總體積，9.4×10-4 L；ε：細胞色素C摩爾消光系數，1.91×104 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.04 mL；V樣總：加入提取液體積，0.202 mL；T：反應時間，2 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL； W：樣本質量，g；500：細胞或細菌總數，500萬。

注意：
1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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訂貨流程

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1、報價含普票、運費。

 

2、常用試劑備貨充足，除對溫度要求極其嚴格的產品當天可發貨。

  

3、進口原裝產品要3-6周的貨期，詳細情況請咨詢客服。

  

4、訂貨時間為工作日每周一至周五16:00之前。

  

5、如需代為檢測，標本對環境溫度高，可聯系客服安排專人取樣（限省內客戶）。

  

6、代測免收代測費，一周出結果。

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