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產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
游離膽固醇(free cholesterol, FC)含量測定試劑盒 | 分光光度法 | 50管/48樣 | CS-01S63342 |
FC是構(gòu)成細胞膜的主要成分,也是合成腎上腺皮質(zhì)激素、性激素、膽汁酸及維生素D等生理活性物質(zhì)的重要原料。FC濃度可作為脂代謝的指標。
測定原理:
FC氧化酶催化FC生成△4-膽甾烯酮和H2O2,過氧化物酶催化H2O2、4-氨基安替比林和酚生成紅色醌類化合物,在500nm有吸收峰,其顏色深淺與FC含量成正比。
自備儀器和用品:
可見分光光度計、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1mL玻璃比色皿、異丙醇和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:異丙醇50mL(自備);
試劑二:液體50mL×1瓶,4℃保存;
試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存;
試劑四:液體100μL×1瓶,4℃保存;
標準品:液體1mL×1支,濃度為0.5 μ mol/mL,4℃保存。
FC的提取:
1、組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿。8000g,4℃離心10min,取上清置冰上待測。
2. 細菌、真菌:先收集400-500萬細胞或細菌到離心管內(nèi),棄上清,加1mL試劑一,超聲波破碎1min(強度20%,超聲2s,停1s),即FC待測液。
3.血清(漿)樣品:直接測定。
測定操作:
1. 分光光度計預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長到500 nm,蒸餾水調(diào)零。
2.FC工作液的配制:臨用前,吸取約0.8mL試劑二分別加入試劑三和試劑四瓶中,充分溶解后再全部轉(zhuǎn)移回試劑二瓶中,充分混勻,FC工作液置于37℃水浴10min。用不完的工作液4℃保存一周。
3. 標準管:依次在1mL玻璃比色皿中加入100μL FC標準液和900μL FC工作液,混勻,37℃靜置3h后于500nm測定A標準管。
4. 測定管:依次在1mL玻璃比色皿中加入100μL FC待測液和900μL FC工作液,混勻,37℃靜置3h后于500nm測定A測定管。
5、空白管:依次在1mL玻璃比色皿中加入100μL 試劑一和900μL FC工作液,混勻,37℃靜置3h后于500nm測定A測定管。
注意:
1、標準管和空白管只需測定一次。
2、若測定管產(chǎn)生白色渾濁,可以將待測液用異丙醇稀釋2~5倍后測定,并在最后結(jié)果乘以相應(yīng)倍數(shù)。
計算公式:
1. 血清(漿)中FC含量計算:
FC含量(μmol /dL)= C標準液×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)×100mL
=50×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)
C標準液:0.5μmol/mL;100 mL:1dL=100 mL。
2. 組織中FC含量計算:
(1)按樣本蛋白濃度計算
FC含量(μmol / mg prot)= C標準液×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)÷Cpr
= 0.5×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算
FC含量(μmol / g鮮重)= C標準液×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)÷W
= 0.5×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)÷W
C標準液:0.5μmol/mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g/mL
3. 細胞、細菌中FC含量計算:
FC含量(μmol /104 cell)= C標準液×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)÷細菌或細胞(104 cell /L)
=0.5×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)÷細菌或細胞(104 cell /L)
C標準液:0.5μmol/mL。
最低檢出限為1nmol/mL。
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術(shù)有限公司
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