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| 產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
| 酰基轉移酶（alcohol acyl transferase，AAT）活性測定試劑盒 | 分光光度法 | 50管/48樣 | CS-01Ｓ63347 |
AAT是一個多功能蛋白大家族，主要負責催化生物體內各種；腿ヵ；磻，在基因表達、代謝和信號傳導中具有重要作用。
測定原理：
AAT催化乙酰CoA轉移乙；蕉〈，釋放的CoA還原DTNB生成TNB；TNB在412nm有吸收峰，測定412 nm吸光度增加速率可計算AAT活性。
自備儀器和用品：
研缽、冰、臺式離心機、可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋、無水乙醇。
試劑組成和配制：
提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體50mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存。
試劑三：粉劑×1瓶，4℃避光保存。
粗酶液提取：
1.組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。
2.細菌、真菌：按照細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
3.液體：直接檢測。
AAT測定操作：
1、分光光度計預熱30min，調節波長到412 nm，蒸餾水調零。
2、工作液的配制：臨用前在試劑二瓶中加入45mL試劑一，充分混勻待用。用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
3、試劑三的配制：臨用前加無水乙醇2.5mL充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存。
4、 空白管：在Ep管或96孔板中加入50μL提取液和900μL工作液，充分混勻，35℃反應15min，加入50μL試劑三，充分混勻，25℃靜置10min，測定412nm處吸光值，記為A空白管。
5、 測定管：在Ep管或96孔板中加入50μL樣本和900μL工作液，充分混勻，35℃反應15min，加入50μL試劑三，充分混勻，25℃靜置10min，測定412nm處吸光值，記為A測定管！A=A測定管- A空白管，空白管只要做一管。
AAT活性計算公式：
（1）按照蛋白濃度計算
活性單位定義：每毫克蛋白每分鐘催化產生1nmol TNB定義為一個酶活單位。
AAT (nmol/min /mg prot) = △A ÷（×d）×V反總÷（V樣×Cpr）÷T = 98.04×△A÷Cpr
（2）按照樣本質量計算
活性單位定義：每克組織每分鐘催化產生1nmol TNB定義為一個酶活單位。
AAT (nmol/min /g 鮮重) = △A ÷（×d）×V反總÷(W×V樣÷V樣總) ÷T = 98.04×△A÷W
（3）按細胞數量計算
活性單位定義：每104個細胞每分鐘催化產生1nmol TNB定義為一個酶活單位。
AAT (nmol/min /104cell) = △A ÷（×d）×V反總÷(細胞數量×V樣÷V樣總) ÷T
= 98.04×△A÷ 細胞數量
（4）按液體體積計算
活性單位定義：每毫升樣品每分鐘催化產生1nmol TNB定義為一個酶活單位。
AAT (nmol/min /mL) = △A ÷（×d）×V反總÷V樣÷T =98.04×△A
：TNB消光系數，13600L/mol/cm；V反總：反應總體積，1mL；V樣：加入反應體系中上清液體積，0.05mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：蛋白含量，mg/mL；W：樣本質量，g；T：反應時間，15 min。
原創作者：上海莼試生物技術有限公司
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