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產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)活性測定試劑盒 | 分光光度法 | 50管/24樣 | CS-01S63354 |
GOT(?
測定原理
GOT催化 α-同戊二酸和天門冬氨酸發(fā)生轉(zhuǎn)氨基反應(yīng),生成谷氨酸和草酰乙酸,草酰乙酸進一步自行脫羧生成丙酮酸;丙酮酸可與2,4-二硝基苯肼反應(yīng)生成2,4-二硝基苯腙,在堿性條件下顯棕紅色;測定505nm吸光度的變化,即可計算GOT酶活力。
需自備的儀器和用品
可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
提取液:液體30mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體5mL×1瓶, 4℃保存;
試劑二:液體5mL×1瓶, 4℃保存;
試劑三:液體50 mL×1瓶,4℃保存;
樣品測定的準備
1、細菌、細胞或組織樣品的制備:
細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿)樣品:直接檢測。
測定操作表
1、分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至505nm,蒸餾水調(diào)零。
2、在EP管中加入下列試劑
混勻,室溫放置10min,在505nm波長處,測各管吸光度A。ΔA=A測定-A對照。每個測定管需設(shè)一個對照管。
計算
1、標準條件下測定的回歸曲線, y = 0.4768x-0.0013 (x為標準品濃度,umol/mL;y為ΔA)。
2、血清(漿)GOT活力的計算
單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。
GOT(nmol/min/mL)=(ΔA+0.0013)÷0.4768÷T×103=104.9×(ΔA+0.0013)
3、細胞、細菌和組織中GOT活力的計算
(1)按樣本蛋白濃度計算:
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。
GOT(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0013)÷0.4786×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103 =104.9×(ΔA+0.0013)÷Cpr
需要另外測定,建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。
(2) 按樣本鮮重計算:
單位的定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。
GOT(nmol/min/g鮮重)=[(ΔA+0.0013)÷0.4768×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103 =104.9×(ΔA+0.0013)÷W
(3)按細菌或細胞密度計算:
單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。
GOT(nmol/min/104 cell)=[(ΔA+0.0013)÷0.4768×V1]÷(500×V1÷V2)÷T×103 =0.21×(ΔA+0.0013)
V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時間,20min;Cpr:蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細胞或細菌總數(shù),500萬;103:1umol/mL=103 nmol/mL。
1、標準曲線線性范圍為:0.01 umol/mL -2 umol/mL。
2、ΔA線性范圍為:0.01 -2。
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術(shù)有限公司
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