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1、細菌或培養細胞樣品：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議1000萬細菌或細胞加入2mL試劑一），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 常溫離心10min，取上清，置冰上待測。

2、組織樣品：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.2g組織，加入2mL試劑一），進行冰浴勻漿。8000g 常溫離心10min，取上清，置冰上待測。

3、血清（漿）或細胞培養液樣品：按照血清（漿）或細胞培養液體積（mL）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議取0.2mL血清（漿）或者細胞培養液加入2mL試劑一），進行冰浴勻漿。8000g 常溫離心10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟

1、分光光度計預熱30min以上，調節波長至570nm，蒸餾水調零。

2、在有蓋EP管中加入下列試劑：

混勻，90℃水浴20min（蓋緊，以防止水分散失），流水冷卻，于570nm波長處比色，△A=A測定管-A對照管。對照管只要做一管。

谷氨酸含量計算：

1、標準條件下測定回歸方程為y = 0.0074x- 0.5255；x為谷氨酸含量（μg/mL），y為吸光值。

2、按照血清（漿）或者細胞培養液體積計算

谷氨酸含量(μg/mL)= [(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(V3×V1÷V2）=1351×(△A+0.5255)

3、按照蛋白濃度計算

谷氨酸含量(μg/mg prot)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(V1×Cpr)=135.1×(△A+0.5255) ÷Cpr

4、按照樣本質量計算

谷氨酸含量(μg/g鮮重)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(W ×V1÷V2)=270.2×(△A+0.5255) ÷W

5、按照細菌或細胞密度計算

谷氨酸含量(μg/104 cell)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(1000×V1÷V2)=0.27×(△A+0.5255)

V1：加入反應體系中樣本體積，1mL；V2：加入提取液體積，2 mL；V3：加入血清（漿）或細胞培養液體積，0.2 mL； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；1000：細菌或細胞總數，1000萬。

注意：

1、該試劑盒僅適用于發酵液或組織中谷氨酸含量測定，檢測下限為100μg/mL。

2、標準曲線線性范圍為：100μg/mL -600μg/mL。

3、ΔA線性范圍為：0.01-2；若大于2則需要將上清液用試劑一稀釋至適當倍數后測定，計算公式中乘以相應稀釋倍數。

注意：

1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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