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產(chǎn)品名稱	檢測方法	規(guī)格	貨號
甲醛脫氫酶（Formaldehyde Dehydrogenase，F(xiàn)DH）試劑盒	分光光度法	50T/48S	CS-01Ｓ63381

注意：正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

甲醛是一種能與蛋白質(zhì)、核酸和脂類產(chǎn)生非特異性反應(yīng)的活潑化合物，對所有生物都具有很高毒性。甲醛脫氫酶作為含鋅中等鏈醇脫氫酶（ADH）的家庭成員之一，廣泛存在于原核和真核生物中，該酶能利用NAD+作為輔酶，將有毒的甲醛氧化，是甲醛氧化途徑中的關(guān)鍵酶。

商品介紹：

測定原理

甲醛脫氫酶催化甲醛和NAD+產(chǎn)生NADH，在340nm處的吸光值會增加，測定340nm處的吸光值變化，可計算得到甲醛脫氫酶的活性。

自備實驗用品及儀器

天平、離心機(jī)、分光光度計、1mL玻璃比色皿、蒸餾水。

試劑組成和配制

提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體30mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入15mL水溶解待用，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入3mL水溶解待用。

試劑四：液體3mL×1瓶，4℃避光保存。

FDH提取

1.組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后10000g，4℃，離心20min。

2.細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后10000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。

3.液體：直接檢測。

測定操作表

1、分光光度計預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。

2、操作表

在比色皿中加入如下試劑

混勻，于340nm下測定初始吸光值A1與5min后的吸光值A2，△A=A2-A1。

若樣本數(shù)量較多，可將試劑按比例配成工作液使用。

FDH酶活計算

（1）按蛋白濃度計算

酶活定義：每毫克蛋白每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個酶活單位。

FDH酶活（nmol/min/mg prot）= ×V反總÷（V樣×Cpr）÷T = 322×△A÷Cpr

（2）按樣本質(zhì)量計算

酶活定義：每克樣品每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個酶活單位。

FDH酶活（nmol/min/g 鮮重）= ×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T =322×△A÷W

（3）按照細(xì)胞數(shù)量計算

酶活定義：每104個細(xì)胞每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個酶活單位。

FDH酶活（nmol/min/104cell）= ×V反總÷（V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量（萬個））÷T= 322×△A÷細(xì)胞數(shù)量

（4）按液體體積計算

酶活定義：每mL樣本每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個酶活單位。

FDH酶活（nmol/min/mL）= ×V反總÷V樣÷T=322×△A

：NADH微摩爾消光系數(shù)，6.22×10-3 L/μmol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)體系總體積，1mL；V樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.1mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；T，反應(yīng)時間，5min；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g

注意：

1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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