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產品名稱	檢測方法	規格	貨號
腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（ADP-glucose pyrophosphorylase，AGP）活性測定試劑盒	分光光度法	25管/24樣	CS-01Ｓ63373

注意：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

AGP (EC 2.7.7.21)主要存在于植物中，催化葡萄糖-1-磷酸與ATP反應生成淀粉合成的直接前體ADPG，是植物淀粉生物合成的主要限速步驟。

商品介紹：

測定原理

AGP催化的逆向反應生成G1P，在反應體系中添加的磷酸己糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH，340nm下測定NADPH增加速率，即可計算AGP活性。

需自備的的儀器和用品

紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水

試劑的組成和配制

提取液：液體25mL×1瓶，4℃保存;

試劑一：液體20mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入9mL蒸餾水充分溶解備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融；

試劑三：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入5mL蒸餾水充分溶解備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融；

粗酶液制備

按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟

1、分光光度計預熱30min以上，調節波長至340nm，蒸餾水調零。

2、試劑一置30℃保溫10min以上。

3、在EP管中按順序加入下列試劑

混勻后，立即于340 nm波長下記錄初始吸光度A1和 2min后的吸光度A2，計算ΔA=A2-A1。

AGP活性計算

1、按樣本蛋白蛋白濃度計算

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產生1nmol NADPH定義為一個酶活性單位。

AGP（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T×稀釋倍數

=2813×ΔA÷Cpr

此法需要自行測定樣本蛋白質濃度。

2、按照樣本鮮重計算

單位的定義：每g組織每分鐘催化產生1nmol NADPH定義為一個酶活力單位。

AGP（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W× V樣÷V樣總）÷T×稀釋倍數

=2813×ΔA÷W

V反總：反應體系總體積，1×10-3 L；ε：NADPH摩爾消光系數，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.04mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，2 min；稀釋倍數：1.4；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量。

注意：

1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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