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產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
α-淀粉酶(α-amylase,α-AL)試劑盒 | 分光光度法 | 50管/24樣 | CS-01S63379 |
淀粉酶負責(zé)水解淀粉,包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-淀粉酶(EC
測定原理:
還原糖還原3,5-二硝基水楊酸生成棕紅色物質(zhì)。β-淀粉酶不耐熱,在70℃鈍化15min,從而測定α-淀粉酶活性。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、玻璃比色皿、研缽和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:25mL×1瓶,常溫保存,若有黃色晶體析出,需90℃加熱溶解后再用;
試劑二:20mL×1瓶,4℃保存,若有沉淀析出,需70℃加熱溶解后再用。
粗酶液提取:
組織:稱取0.1~0.2g樣本(建議稱取約0.1g樣本),加1 mL蒸餾水勻漿;將勻漿倒入離心管中,在室溫下放置提取15min,每隔5min振蕩1次,使其充分提取;3000g,25℃離心10min,吸取上清液并且加蒸餾水定容至10 mL,搖勻,即為淀粉酶原液。
血清(漿):直接檢測。
操作步驟和加樣表(在1.5mLEP管中依次加入下列試劑):
1、分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長到540 nm,蒸餾水調(diào)零。
2、試劑一或試劑二40℃預(yù)熱10min
3、測定步驟
混勻,95℃水浴5min,冷卻, 540nm處讀取對照管和測定管吸光度,計算ΔA=A測定管-A對照管。
α-淀粉酶活性計算:
1、標準條件下測定回歸曲線為y=3.7215x -0.1778; x為標準品濃度(mg/mL),y為吸光值。
2、α 淀粉酶活性
(1)按照樣本質(zhì)量計算
單位定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個酶活力單位。
α 淀粉酶活性(mg/min/g鮮重)=[(ΔA+0.1778)÷3.7215×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T=1.075×(ΔA+0.1778)÷W
(2)按照蛋白質(zhì)含量計算
單位定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個酶活性單位。
α 淀粉酶活性(mg/min/mg prot)= [(ΔA+0.1778)÷3.7215×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T=0.1075×(ΔA+0.1778) ÷Cpr
(3)血清(漿)樣本中α 淀粉酶活性計算
單位定義:每mL血清(漿)每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個酶活性單位。
α 淀粉酶活性(mg/min/mL)= [(ΔA+0.1778)÷3.7215×V反總]÷V樣÷T=0.1075×(ΔA+0.1778)
V反總:反應(yīng)體系總體積,0.5mL;V樣:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.25 mL;V樣總:提取液總體積,10 mL; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時間,5min。
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術(shù)有限公司
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