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產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
漆酶(Laccase)試劑盒 | 分光光度法 | 50管/24樣 | CS-01S63405 |
漆酶(CE
測定原理
漆酶分解底物ABTS產生ABTS自由基,在420nm處的吸光系數遠大于底物ABTS,測定ABTS自由基的增加速率,可計算得漆酶活性。
自備實驗用品及儀器
天平、低溫離心機、可見分光光度計、1 mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制
提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體50mL×1瓶,4℃保存。
工作液:粉劑×1瓶,4℃避光保存,臨用前加25mL試劑一溶解;用不完的試劑4℃保存一周。
酶液提取
1.組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。12000g 4℃離心30min,取上清,置冰上待測。
2.細胞:按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后4℃,10000g離心10min,取上清置于冰上待測。
3.培養液:直接檢測。
測定操作表
注意:
1、極少數樣本在60℃水浴20min后會出現沉淀,可經過8000g 25℃離心10min后,取上清檢測,例如成熟的水稻葉片樣本。
2、為確保檢測準確性,若ΔA大于2,將樣本用提取液稀釋2~10倍后重新檢測,計算公式乘以相應稀釋倍數。
酶活性計算公式
1.按照蛋白濃度計算
酶活性定義:每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位。
漆酶活性(nmol/min /mg prot)= ×V反總÷(V樣×Cpr)÷T= 9.26×△A÷Cpr
2.按照樣本質量計算
酶活性定義:每克樣品每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位。
漆酶活性(nmol/min /g 鮮重)= ×V反總÷(V樣×W÷V樣總)÷T= 9.26×△A÷W
3.按照細胞數量計算
酶活性定義:每104個細胞每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位。
漆酶活性(nmol/min/104 cell)= ×V反總÷(V樣×細胞數量÷V樣總)÷T= 9.26×△A÷細胞數量
4.按照液體體積計算
酶活性定義:每升培養液每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位。
漆酶活性(nmol/min /L)= ×V反總÷V樣÷T= 9260×△A
ε:ABTS毫摩爾消光系數:36L/mmol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V反總:反應總體積,1mL;V樣:反應中樣本體積,0.15mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W,樣本質量,g;T:反應時間,20min
原創作者:上海莼試生物技術有限公司
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