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產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
亞鐵氧化酶(Hephaestin,HP)試劑盒 | 分光光度法 | 50管/24樣 | CS-01S63402 |
Hephaestin (HP)作為銅藍蛋白的同系物,是近年來發現的鐵轉運蛋白亞鐵氧化酶,HP屬亞鐵氧化酶家族成員,具有亞鐵氧化酶的活性,參與體內鐵代謝。HP的表達可受鐵、銅及鋅等金屬離子的調節。HP催化Fe2+氧化生成Fe3+,在介導鐵的跨膜轉運中有重要作用。
測定原理:
HP催化Fe2+氧化為Fe3+,Fe2+和ferrozine反應顯色,在560 nm下有特征吸光值。通過測定Fe2+的減少速率可測得亞鐵氧化酶的活性。
自備用品:
可見分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體50 mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:液體3 mL×1瓶,4℃保存;
試劑三:液體30 mL×1瓶,4℃避光保存。
粗酶液提。
按照組織質量(g):水mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL蒸餾水),進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
測定步驟:
1.分光光度計預熱30min以上,調節波長至560 nm,蒸餾水調零。
2. 在玻璃比色皿中加入下列試劑
HP活性計算:
標準曲線:y = 16.427x - 0.0006,R2 = 0.9998;(x為標準品濃度,μmol/mL;y為吸光值ΔA)
(1)按樣本質量計算
單位定義:每g樣本每分鐘氧化1nmol Fe2+定義為一個酶活力單位。
HP(nmol/min/g 鮮重)=(△A+0.0006)÷ 16.427×V總÷T ÷(W× V樣÷V樣總)× 1000
= 20.29×(△A+0.0006)÷W
(2)按樣本蛋白濃度計算
單位定義:每mg蛋白每分鐘氧化1nmol Fe2+定義為一個酶活力單位。
HP(nmol/min/mg prot)=(△A+0.0006)÷ 16.427×V總÷T ÷(Cpr×V樣)× 1000
= 20.29×(△A+0.0006)÷Cpr
V總:反應體系體積,0.1 mL;V樣:加入樣本體積0.01 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,30min;W:樣品質量,g;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;1000,μmol到nmol的轉換系數。
原創作者:上海莼試生物技術有限公司
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