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產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
果膠裂解酶(pectinate lyases,PL)試劑盒 | 分光光度法 | 50管/24樣 | CS-01S63395 |
果膠裂解酶(EC
測定原理
果膠裂解酶作用于果膠中的α-1,4糖苷鍵,生成在還原端C4和C5之間位置具有不飽和鍵的不飽和寡聚半乳糖醛酸,在235nm處有特征吸收峰。
自備實驗用品及儀器
天平、低溫離心機、紫外分光光度計、1 mL石英比色皿、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制
提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體15mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體15mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體15mL×1瓶,4℃保存。
酶液提取
1.組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。10000g ,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2.細菌、真菌:按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后10000g,4℃離心10min,取上清置于冰上待測。
3. 培養液:直接測定。
測定操作表
酶活性計算公式
1. 組織中PL活性
(1)按照蛋白濃度計算
酶活性定義:在40℃,pH5.5條件下,每毫克蛋白每分鐘分解果膠產生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個酶活力單位。
PL活性(nmol/min/mg prot)= A÷(ε×d)×V反總÷(V樣×Cpr)÷T
= 64.1×A÷Cpr
(2)按照樣本質量計算
酶活性定義:在40℃,pH5.5條件下,每克組織每分鐘分解果膠產生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個酶活力單位。
PL活性(nmol/min/g 鮮重)= A÷(ε×d)×V反總÷(V樣×W÷V樣總)÷T
= 64.1×A÷W
2. 細胞PL活性
酶活性定義:在40℃,pH5.5條件下,每104個細胞每分鐘分解果膠產生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個酶活力單位。
PL活性(nmol/min/104cell)= A÷(ε×d)×V反總÷(V樣×細胞數量÷V樣總)÷T
= 64.1×A÷細胞數量
3. 培養液PL活性
酶活性定義:在40℃,pH5.5條件下,每毫升培養液每分鐘分解果膠產生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個酶活力單位。
PL活性(nmol/min/mL)= A÷(ε×d)×V反總÷V樣÷T
= 64.1×A
ε:不飽和半乳糖醛酸摩爾消光系數:5200L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V反總:反應總體積,1mL;V樣:反應體系中樣本體積,0.1mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W,樣本質量,g;T:反應時間,30min
原創作者:上海莼試生物技術有限公司
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