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標(biāo)簽:植酸酶(phytase)試劑盒
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人增殖誘導(dǎo)配體酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)驗(yàn)技術(shù)
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產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
植酸酶(phytase)試劑盒 | 分光光度法 | 50管/24樣 | CS-01S63400 |
植酸酶(phytase)是催化植酸及其鹽類水解為肌醇與磷酸(鹽)的一類酶的總稱,屬磷酸單酯水解酶,它能將食品和飼料中植酸及其鹽轉(zhuǎn)化為可供有機(jī)體利用的有效磷,降低糞便中的磷含量,減輕對環(huán)境的污染,改善營養(yǎng)成分的吸收和利用,因此具有極其廣泛的研究和應(yīng)用價(jià)值。
測定原理
植酸酶在一定溫度和pH值條件下,水解底物植酸鈉生成無機(jī)磷與肌醇衍生物,無機(jī)磷在酸性環(huán)境中與鉬酸銨顯色劑反應(yīng)生成藍(lán)色復(fù)合物,在700nm處有特征吸收峰,根據(jù)700nm處吸光值變化可計(jì)算得植酸酶活性。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器
天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1 mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋,超聲溶解器,回旋式振蕩器。
試劑組成和配制
提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存。
緩沖液:液體25mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:粉劑×1瓶,4℃保存,臨用前加緩沖液10mL配制,現(xiàn)用現(xiàn)配;用不完的試劑4℃保存一個(gè)月。
試劑二:液體25mL×1瓶,4℃保存。
顯色劑:粉劑×6瓶,4℃保存,臨用前根據(jù)用量每瓶加1mL雙蒸水溶解,再加4mL試劑二混勻。
樣本處理
1.酶制劑:按照質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:500~1000的比例(建議稱取約0.001g,加入1mL提取液)加入提取液,在超聲波溶解器上溶解15min,再用回旋式振蕩器振蕩15min,待測。
2.組織:按照質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,在超聲波溶解器上溶解15min,再用回旋式振蕩器振蕩15min,4℃,4000g離心10min,取上清待測。
3.飼料樣品:飼料烘干粉碎,過40目篩,按照質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,在超聲波溶解器上溶解15min,再用回旋式振蕩器振蕩15min,4℃,4000g離心10min,取上清待測。
4.培養(yǎng)液等液體樣品,混勻直接測定。
測定操作表
混勻,37℃靜置15min,10000g,室溫,離心5min,取上清,蒸餾水調(diào)零,測定700nm處吸光值,△A=A測定管-A對照管。每個(gè)測定管設(shè)一個(gè)對照管。
酶活性計(jì)算公式
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 0.2764x + 0.0082,R2 = 0.9998;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μmol/mL),y為吸光值。
1.按照蛋白濃度計(jì)算
酶活性定義:在37℃,pH5.5的條件下,每毫克蛋白每分鐘從5mmol/L的植酸鈉溶液中釋放出1μmol的無機(jī)磷為一個(gè)酶活力單位。
植酸酶活性(μmol/min/mg prot)=(△A-0.0082)÷0.2764÷Cpr÷T =0.1206×(△A-0.0082)÷Cpr2.按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活性定義:在37℃,pH5.5的條件下,每克樣本每分鐘從5mmol/L的植酸鈉溶液中釋放出1μmol的無機(jī)磷為一個(gè)酶活力單位。
植酸酶活性(μmol/min /g 鮮重)=(△A-0.0082)÷0.2764÷W÷T =0.1206×(△A-0.0082)÷W
3. 培養(yǎng)液等液體樣品
酶活性定義:在37℃,pH5.5的條件下,每毫升液體每分鐘從5mmol/L的植酸鈉溶液中釋放出1μmol的無機(jī)磷為一個(gè)酶活力單位。
植酸酶活性(μmol/min /mL)=(△A-0.0082)÷0.2764÷T =0.1206×(△A-0.0082)
Cpr:樣本蛋白含量,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,30min。
注意事項(xiàng)
1、顯色劑需要臨用前根據(jù)用量配制,每一瓶是10個(gè)樣本的用量,新配制的顯色劑若有顏色則已經(jīng)污染或者試劑過期,應(yīng)放棄使用。
2、ΔA線性范圍為0.01-2。
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術(shù)有限公司
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2、常用試劑備貨充足,除對溫度要求極其嚴(yán)格的產(chǎn)品當(dāng)天可發(fā)貨。
3、進(jìn)口原裝產(chǎn)品要3-6周的貨期,詳細(xì)情況請咨詢客服。
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