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β-GAL(EC 3.2.1.23)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，能夠催化β半乳糖苷化合物中β半乳糖苷鍵水解，此外還具有轉半乳糖苷的作用。β-GAL不僅可為植物的快速生長釋放儲存的能量，還能在正常的多糖代謝、細胞壁組分代謝以及衰老時細胞壁降解過程中催化多糖、糖蛋白以及半乳糖脂末端半乳糖殘基的水解，釋放自由的半乳糖。

商品介紹：

測定原理：

β-GAL分解對-硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷生成對-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計算β-GAL活性。

自備用品：

可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制：

提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前每瓶加入5mL蒸餾水，充分溶解備用；用不完的試劑仍-20℃保存。

試劑二：液體15mL×1瓶，4℃保存。

試劑三：液體50mL×1瓶，4℃保存。

粗酶液提?。?/span>

1、細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

3、培養液等液體樣本：直接檢測。

測定步驟：

1、分光光度計預熱30min以上，調節波長至400nm，蒸餾水調零。

2、樣本測定（在EP管中依次加入下列試劑）：

β-GAL活性計算：

標準條件下測定的回歸方程為y =0.00543x -0.0027；x為標準品濃度（nmol/mL），y為吸光值。

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。

β-GAL活力(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T

=61.39×(ΔA+0.0027) ÷Cpr

需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質含量測定試劑盒。

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義：每g組織每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。

β-GAL活力(nmol/min /g鮮重)＝[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=61.39×(ΔA+0.0027) ÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。

β-GAL活力(nmol/min /104 cell)=[(ΔA+0.0027) ÷0.00543×V反總]÷(500×V樣÷V樣總)÷T

=0.123×(ΔA +0.0027)

（4）按液體體積計算：

單位的定義：每mL液體樣本每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。

β-GAL活力(nmol/min /mL)＝[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V反總]÷V樣÷T

=61.39×(ΔA+0.0027)

V反總：反應體系總體積，0.5mL；V樣：加入反應體系中樣本體積，0.05mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g； 500：細胞或細菌總數，500萬；T：反應時間，30min。

注意：

1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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