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標(biāo)簽:幾丁質(zhì)酶(Chitinase)試劑盒
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人增殖誘導(dǎo)配體酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)驗(yàn)技術(shù)
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產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
幾丁質(zhì)酶(Chitinase)試劑盒 | 分光光度法 | 50管/24樣 | CS-01S63422 |
幾丁質(zhì)主要存在于蝦、蟹、昆蟲等甲殼類動(dòng)物的外殼與軟體動(dòng)物的器官(例如烏賊的軟骨),以及真菌類的細(xì)胞壁中。而幾丁質(zhì)酶(EC
測定原理
幾丁質(zhì)酶水解幾丁質(zhì)產(chǎn)生N-乙酰氨基葡萄糖,進(jìn)一步與對(duì)二甲氨基苯甲醛產(chǎn)生紅色化合物,在585nm處有特征吸收峰,吸光值增加速率反映了幾丁質(zhì)酶的活性。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器
天平、水浴鍋、離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1 mL玻璃比色皿,蒸餾水。
試劑組成和配制
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體10mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體10mL×1瓶,4℃保存。(若出現(xiàn)結(jié)晶,可80℃左右加熱溶解后使用)
試劑三:液體10mL×1瓶,4℃保存。
試劑四:液體20mL×1瓶,4℃避光保存。
粗酶液提取
1.組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,然后10000g,4℃離心20min,取上清,置冰上待測。
2.真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后10000g,4℃,離心20min,取上清置于冰上待測。
3.培養(yǎng)液:直接測定。
測定操作表
計(jì)算公式
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y=0.3088-0.003,R2=0.9995
計(jì)算公式:
1、按照樣本重量計(jì)算
酶活性定義:37℃條件下,每克組織每小時(shí)分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個(gè)酶活性單位。
幾丁質(zhì)酶活性(mg/h/g鮮重)=(ΔA+0.003)÷0.3088×V反總÷(V樣÷V樣總×W) ÷T
=8.096×(ΔA +0.003)÷W
2、按照蛋白質(zhì)濃度計(jì)算
酶活定義:37℃條件下,每毫克蛋白每小時(shí)分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個(gè)酶活單位。
幾丁質(zhì)酶活性(mg/h mg prot)=(ΔA+0.003)÷0.3088×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T
= 8.096×(ΔA +0.003)÷Cpr
3、按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活定義:37℃條件下,每104個(gè)細(xì)胞每小時(shí)分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個(gè)酶活單位。
幾丁質(zhì)酶活性(mg/h /104 cell)=(ΔA+0.003)÷0.3088×V反總÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)
=8.096×(ΔA +0.003)÷細(xì)胞數(shù)量
4、按液體體積計(jì)算
酶活定義:37℃條件下,每毫升培養(yǎng)液每小時(shí)分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個(gè)酶活單位。
幾丁質(zhì)酶活性(mg/h /mL)=(ΔA+0.003)÷0.3088×V反總÷V樣=8.096×(ΔA +0.003)
V反總:反應(yīng)體系總體積,1mL;V樣:反應(yīng)體系中樣本體積,0.4mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;W:樣本質(zhì)量,g;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL
注意事項(xiàng)
1、反應(yīng)結(jié)束后立即進(jìn)行比色。
2、試劑四有一定的毒性,請(qǐng)操作時(shí)做好防護(hù)措施。
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術(shù)有限公司
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