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標(biāo)簽:海藻糖酶（Trehalase THL）試劑盒
聯(lián)系人:高小姐
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人增殖誘導(dǎo)配體酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)驗(yàn)技術(shù)
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| 產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 海藻糖酶（Trehalase，THL）試劑盒 | 分光光度法 | 50管/24樣 | CS-01Ｓ63423 |
THL（EC
測定原理：
THL催化海藻糖產(chǎn)生葡萄糖，葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并產(chǎn)生過氧化氫；過氧化物酶催化過氧化氫氧化4-氨基安替比林偶聯(lián)酚，生成有色化合物，在505 nm有特征吸收峰，以此反映THL活性。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：液體30mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體10mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：液體25ml×1瓶，4℃保存；
試劑三：液體25ml×1瓶，4℃保存；（若出現(xiàn)結(jié)冰現(xiàn)象，可37℃水浴溶解后使用）
樣品測定的準(zhǔn)備：
1、細(xì)菌或細(xì)胞的處理：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3S，間隔10S，重復(fù)30次）；8000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、組織的處理：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），冰浴中勻漿。8000g ，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
3、血清（漿）的處理：按照血清（漿）體積（mL）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議取0.1mL血清（漿）加入1mL提取液），冰浴中勻漿。8000g ，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
測定步驟：
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至505nm，蒸餾水調(diào)零。
2、調(diào)節(jié)水浴鍋至95度。
3、工作液的配制：使用前將試劑二和試劑三1:1等體積混合，用多少配多少。
4、加樣表（在EP管中依次加入下列試劑）：
混勻，置37℃（哺乳動物）或25'C（其它物種）保溫15min后，于505nm波長處讀取吸光度。計(jì)算ΔA=A測定管-A對照管。每個(gè)測定管需設(shè)一個(gè)對照管。
THL活力計(jì)算：
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸方程為y = 0.4858x - 0.0042，R2 = 0.9999；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/mL），y為吸光值。
2、按照蛋白濃度計(jì)算
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。
THL活力(nmol/min/mg prot)=(ΔA+0.0042) ÷0.4858×V反總÷(V樣×Cpr)÷T×1000
=366× (ΔA+0.0042) ÷Cpr
3、按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。
THL活力(nmol/min/g 鮮重)=(ΔA+0.0042) ÷0.4858×V反總÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T×1000
=366×(ΔA+0.0042)÷W
4、按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
單位的定義：每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。
THL活力(nmol/min/104 cell)=(ΔA+0.0042) ÷0.4858×V反總÷(500 ×V樣÷V樣總) ÷T×1000
=0.732×(ΔA+0.0042)
5、按血清（漿）體積計(jì)算
單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。
THL活力(nmol/min/mL)=(ΔA+0.0042) ÷0.4858×V反總÷(V液 ×V樣÷V樣總) ÷T×1000
=3660×(ΔA+0.0042)
V樣：加入樣本體積：0.09mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；V反總：反應(yīng)體系總體積，0.24mL；V液：加入血清（漿）體積，0.1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬；T：反應(yīng)時(shí)間，15min；
原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司
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