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產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
β-葡萄糖醛酸苷酶(β-glucuronidase,β-GD)試劑盒 | 分光光度法 | 50管/48樣 | CS-01S63427 |
β-GD廣泛存在于動物組織中,是一種參與腫瘤侵襲和轉移過程的基質降解酶,具有水解固醇葡萄糖醛酸和酸性粘多糖等生理功能。該酶在肝細胞中含量較高。此外在胃癌組織中含量豐富,測定胃液β-GD活性對于研究胃癌具有重要的意義。
測定原理
β-GD催化苯酚 β-D-葡萄糖醛酸產生游離的酚酞,通過測定苯酚含量反應該酶活性高低。
需自備的儀器和用品
可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
提取液:液體60mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體5mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入5mL蒸餾水,充分溶解待用;用不完的試劑仍-20℃保存;
試劑三:液體37.5mL×1瓶,4℃保存;
試劑四:1μmol/mL標準儲備液10mL,4℃保存;
樣品測定的前處理
按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
測定步驟
1、分光光度計預熱30min以上,調節波長至540nm,蒸餾水調零。
2、樣本測定(在EP管中加入下列試劑)
注意:標準管和空白管只需測一次。
β-GD活性計算
(1)按樣本鮮重計算:
單位定義:每小時每g鮮重樣品中催化產生 1μmol酚酞的量為一個活力單位。
β-GD(μmol/h/g 鮮重)= (C標準管×V1)×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)÷(W×V1÷V2)÷T=2×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)÷W
(2)按樣本蛋白濃度計算:
單位定義:每小時每mg組織蛋白催化產生 1μmol酚酞的量為一個活力單位。
β-GD(μmol/h /mg prot)= (C標準管×V1)×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)÷(V1×Cpr)÷T=2×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)÷Cpr
C標準管:標準管濃度, 1μmol/mL;V1:加入樣本體積:0.05mL;V2:加入提取液體積,1mL;T:反應時間,0.5h;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g。
原創作者:上海莼試生物技術有限公司
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