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產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
乳酸含量(lactic acid,LA)試劑盒 | 分光光度法 | 50管/24樣 | CS-01S63411 |
乳酸是生物體代謝過程中重要的中間產物,與糖代謝、脂類代謝、蛋白質代謝及細胞內能量代謝密切相關,乳酸含量是評估糖元代謝的和有氧代謝的重要指標。
測定原理
乳酸在乳酸脫氫酶的作用下生成丙酮酸,同時使NAD+還原生成NADH和H+,H+傳遞給PMS生成的PMSH2還原INT生成紅色物質,在530nm處有特征吸收峰。
自備實驗用品及儀器
天平、研缽、離心機、可見分光光度計、1 mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制
提取液:液體55mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體5mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體12mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1支,-20℃避光保存。臨用前加入1.5mL蒸餾水充分溶解。
試劑四:粉劑×1瓶,4℃避光保存。臨用前加15mL蒸餾水充分溶解。
試劑五:粉劑×1支,4℃避光保存。
標準品:液體1mL×1支,4℃保存。
顯色液:臨用前根據用量按照提取液(V):試劑三(V):試劑四(V):試劑五(m)=1(mL):0.3(mL):3(mL):15(mg)的比例充分混勻。(注意:現配現用,用多少配多少,在棕色瓶中配制,試劑盒中帶有5個棕色空瓶)
樣本處理
1.組織:按照質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴勻漿后于4℃,12000g離心10min,取上清測定。
2.細胞:按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);于4℃,12000g離心10min,取上清測定。
3.血清:直接測定。
測定操作
計算公式
1. 按照蛋白含量計算
LA含量(μmol/mg prot)=△A樣÷△A標×C標÷ Cpr
=2×△A樣÷△A標÷ Cpr
2. 按照樣本質量計算
LA含量(μmol/g 鮮重)=△A樣÷△A標×C標÷ W
=2×△A樣÷△A標÷ W
3.按照細胞數量計算
LA含量(μmol/104 cell)=△A樣÷△A標×C標÷ 細胞數量
=2×△A樣÷△A標÷ 細胞數量
4. 按照液體體積計算
LA含量(μmol/mL)=△A樣÷△A標×C標
=2×△A樣÷△A標
C標:標準品濃度,2mmol/L ;W:樣本質量,g/mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL
注意事項
1.若吸光值超過2,請進行適當的稀釋后再進行測定,并在計算公式中乘以稀釋倍數。
2.最低檢出限為1.8μmol/L。
原創作者:上海莼試生物技術有限公司
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