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甲基檸檬酸合酶(metheyl-citrate synthase,MCS)試劑盒分光光度法25管/24樣

  • 產(chǎn)品貨號:CS-01S63413
  • 產(chǎn)品價格:電議
  • 產(chǎn)品產(chǎn)地:進(jìn)口、國產(chǎn)
  • 包裝類型:25管/24樣
  • 采購熱度:306
  • 庫存:27
  • CAS號:
  • 方法:分光光度法
  • 含量:
  • 品牌名稱:莼試
  • 分子式:
  • 分子量:

簡介內(nèi)容:甲基檸檬酸合酶(metheyl-citrate synthase,MCS)試劑盒質(zhì)量可靠、價格優(yōu)惠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點(diǎn)。

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標(biāo)簽:甲基檸檬酸合酶(metheyl-citrate synthase MCS)試劑盒 

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商品詳情購物流程代測服務(wù)付款方式常見問題

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產(chǎn)品名稱

檢測方法

規(guī)格

貨號

甲基檸檬酸合酶(metheyl-citrate synthase,MCS)試劑盒

分光光度法

25/24

CS-0163413

   注意:正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義:

MCS廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體基質(zhì)中,與檸檬酸合酶(CS)共同參與三羧酸循環(huán)的調(diào)節(jié)。

商品介紹:

測定原理:

MCS催化丙酰CoA和草酰乙酸產(chǎn)生甲基檸檬酰輔酶A,進(jìn)一步水解產(chǎn)生甲基檸檬酸;該反應(yīng)促使無色的DTNB轉(zhuǎn)變成黃色的TNB,在 412nm處有特征吸光值。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰、無水乙醇和蒸餾水

試劑組成和配制:

試劑一:液體25mL×1瓶,-20℃保存;

試劑二:液體5mL×1瓶,-20℃保存;

試劑三:液體0.5mL×1支,-20℃保存;

試劑四:液體25mL×1瓶,4℃保存;

試劑五:粉劑×1支,4℃保存,臨用前加入800μL無水乙醇;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。

試劑六:粉劑×2支,-20℃保存,臨用前加入400μL蒸餾水;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。

試劑七:粉劑×1支,-20℃保存,臨用前加入800μL蒸餾水;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。

樣本的前處理:

組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:

①稱取約0.1g組織或收集500萬細(xì)胞,加入1mL試劑一和10uL 試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。

②將勻漿600g4℃離心5min

③棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11000g4℃離心10min

④上清液即胞漿提取物,可用于測定從線粒體泄漏的CS(此步可選做)。

⑤在步驟④中的沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3秒,間隔10秒,重復(fù)30次),用于線粒體CS測定。

測定步驟:

1、分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至412nm,蒸餾水調(diào)零。

2、將試劑四、五、六和七在37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)孵育5min

3、樣本測定

將上述試劑按順序加入1 mL玻璃比色皿中,加試劑七的同時開始計時,在412nm波長下記錄20秒時的初始吸光度A1和反應(yīng)2min后的吸光值A2,計算ΔA=A2-A1

MCS活性計算:

1)按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol TNB定義為一個酶活力單位。

MCSnmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=1100×ΔA÷Cpr

此法需要自行測定樣本蛋白質(zhì)濃度。

2)按樣本鮮重計算:

單位的定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol TNB定義為一個酶活力單位。

MCSnmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T=222.2×ΔA÷W

3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算:

單位的定義:每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol TNB定義為一個酶活力單位。

MCSnmol/min/104 cell=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=0.4444×ΔA

V反總:反應(yīng)體系總體積,9×10-4 L;ε:TNB摩爾消光系數(shù),1.36×104 L / mol /cmd:比色皿光徑,1cmV樣:加入樣本體積,0.03 mLV樣總:加入提取液體積,0.202 mLT:反應(yīng)時間,2 minCpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mLW:樣本質(zhì)量,g500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500萬。

注意:
1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康,請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術(shù)有限公司

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