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產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
β-木糖苷酶(β- xylosidase)測定試劑盒 | 分光光度法 | 50管/24樣 | CS-01S63428 |
β-木糖苷酶(EC
測定原理
β-木糖苷酶催化對硝基苯酚-β-D-木糖苷產生對硝基苯酚,對硝基苯酚在405nm處有特征吸收峰,測定405nm光吸收增加速率,可計算β-木糖苷酶活性。
自備實驗用品及儀器
天平、低溫離心機、可見分光光度計、1 mL玻璃比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配制
提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體2mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑二:液體20mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體20mL×1瓶,4℃保存。
粗酶液提取
1.組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進行冰浴勻漿,然后10000g,4℃,離心20min,取上清待測。
2.細菌、真菌:按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后10000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。
3.液體:直接檢測。
測定操作表
β-木糖苷酶活性計算公式
標準曲線:y=13.226x+0.0011,R2=0.9998;x為標準品濃度(μmol/mL),y為吸光值ΔA。
1、按蛋白濃度計算
酶活定義:45℃,pH7.4時每毫克蛋白1min內催化產生1 nmol對硝基苯酚為一個酶活單位。
β-木糖苷酶活性(nmol/min/ mg prot)=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V反總÷(V樣×Cpr)÷T×1000
= 11.34×(ΔA -0.0011)÷ Cpr
2、按樣本質量計算:
酶活定義:45℃,pH7.4時每克樣品1min內催化產生1 nmol對硝基苯酚為一個酶活單位。
β-木糖苷酶活性(nmol/min/g 鮮重)=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V反總÷(V樣÷V樣總×W)÷T×1000= 11.34×(ΔA-0.0011)÷W
3. 按細胞數量計算:
酶活定義:45℃,pH7.4時每104個細胞1min內催化產生1 nmol對硝基苯酚為一個酶活單位。
β-木糖苷酶活性(nmol/min/104cell)=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V反總÷V樣×V樣總÷細胞數量(萬個)÷T×1000=11.34×(ΔA-0.0011) ÷ 細胞數量(萬個)
(4)按液體體積計算
酶活定義:45℃,pH7.4時每毫升液體1min內催化產生1 nmol對硝基苯酚為一個酶活單位。
β-木糖苷酶活性(nmol/min/ mL)=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V反總÷V樣÷T×1000
=11.34×(ΔA-0.0011)
V樣總:加入提取液體積,1mL; V反總:反應總體積,0.6mL;V樣:反應中樣品體積,0.2mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣品質量,g;T:反應時間,20min;1000:1μmol/mL=1000nmol/mL
ΔA控制在0.01-2范圍內,若ΔA大于2,可適當減小樣本量。
標準曲線線性范圍為:0.01μmol/mL-0.5μmol/mL。
原創作者:上海莼試生物技術有限公司
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