13585831301
021-59541103 021-60443211
3004967995
13585831301021-59541103 021-604432113004967995
在線訂購 免費訂購熱線：021-59541103 021-60443211
聯系人:高小姐
電話:021-59541103 021-60443211
手機:13585831301
Q Q： 3004967995
Email:3004967995@qq.com
詳細地址：上海嘉定區嘉羅公路1661
| 產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
| 己糖激酶(hexokinase，HK)試劑盒 | 分光光度法 | 50管/48樣 | CS-01Ｓ63449 |
HK（EC
測定原理
HK催化葡萄糖合成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脫氫酶進一步催化6-磷酸葡萄糖脫氫生成NADPH，NADPH在340nm有特征吸收峰。
需自備的儀器和用品
紫外分光光度計、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
提取液：60mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體30mL×1瓶， 4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入30mL蒸餾水充分溶解備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
試劑三：液體5 mL×1瓶，4℃保存；
試劑四：粉劑×1支，-20℃保存，臨用前加入4mL蒸餾水充分溶解備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
試劑五：粉劑×1支，-20℃保存；臨用前加入2mL蒸餾水充分溶解備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
試劑六：粉劑×1支，-20℃保存；臨用前加入250μL試劑一和250μL蒸餾水充分溶解備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
樣本的前處理
1、細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
3、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟
1、分光光度計預熱30min以上，調節波長至340nm，蒸餾水調零。
2、將試劑一、二、三、四和五37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)預熱10分鐘。
3、加樣表：
將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中，立即混勻，加樣本的同時開始計時，在340 nm波長下記錄20秒時的初始吸光度A1和5分20秒時的吸光度A2，計算ΔA=A2-A1。
注意事項
1、為了減小操作誤差，建議將試劑一、二、三、四、五按比例配成混合液，預熱10min，取30μL樣本+8μL試劑六+1mL混合液，混勻后按照上述步驟檢測。
2、不同勻漿組織中HK活力不一樣，做正式試驗之前請做1-2只預試，若ΔA>0.5，則說明組織活力太高，必須用提取液稀釋成適當濃度勻漿上清液（計算公式中乘以相應稀釋倍數），或縮短反應時間至2min,使ΔA<0.5，以提高檢測靈敏度。
HK活性計算
1、血清（漿）HK活性
單位的定義：每毫升血清（漿）在每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
HK（nmol/min/mL）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=1113×ΔA
2、組織、細菌或細胞中HK活性
（1）按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
HK（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=1113×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
HK（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=1113×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
HK（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=2.226×ΔA
V反總：反應體系總體積，1.038×10-3 L；ε：NADPH摩爾消光系數，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.03 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬。
原創作者：上海莼試生物技術有限公司
留言注意事項：
1.遵守中華人民共和國有關法律、法規，尊重網上道德，承擔一切因您的行為而直接或間接引起的法律責任。
2.請您真實的反映產品的情況,不要捏造、誣蔑、造謠。如對產品有任何疑問,也可以留言咨詢。
3.未經本站同意，任何人不得利用本留言簿發布個人或團體的具有廣告性質的信息或類似言論。
| 您感興趣的產品* | |
| 您的單位* | |
| 聯系人* | |
| 聯系電話* | |
| 詳細地址* | |
| 常用郵箱* | |
| 請輸入您對我們的意見或建議* | |
| 驗證碼* | |
 |
產品訂購說明:
1、報價含普票、運費。
2、常用試劑備貨充足，除對溫度要求極其嚴格的產品當天可發貨。
3、進口原裝產品要3-6周的貨期，詳細情況請咨詢客服。
4、訂貨時間為工作日每周一至周五16:00之前。
5、如需代為檢測，標本對環境溫度高，可聯系客服安排專人取樣（限省內客戶）。
6、代測免收代測費，一周出結果。
7、產品因運輸途中包裝破損請拒絕簽收，做退回。我們將在24小時之內為您補發 損壞產品。
8、如因單位財務制度原因，可申請先發貨，報賬后付款（此條款僅限醫院、學校信譽良好客戶）。
普票匯款信息
賬 戶 名：上海生物
開 戶 行：中國銀行山東省分行營業部
賬 號：2169 2341 6278
關于莼試
產品訂購
新手指南
幫助中心