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1、細胞壁的提取：取約0.3g樣本，加入1mL 80％乙醇，室溫快速勻漿，90℃水浴20min（加熱過程中EP管可能爆開，建議用膠帶封口或使用防爆EP管），冷卻至室溫，6000g 25℃離心10min，棄上清。沉淀加入1.5mL80％乙醇和丙酮各洗一遍（渦旋振蕩2min左右，6000g 25℃離心10min，棄上清即可），沉淀即為粗細胞壁，加入1mL試劑一（去除淀粉）浸泡15小時，6000g 25℃離心10min，棄上清，將沉淀干燥，稱重得細胞壁物質（CWM）。

2、纖維素的提�。悍Q取烘干的CWM約 5mg，加入0.5mL蒸餾水充分勻漿(若烘干物質質地堅硬，可先研碎后再加入0.5mL蒸餾水勻漿，或者用勻漿器勻漿)，勻漿液轉移至EP管中，用蒸餾水定容至0.5mL，置于冰水浴中，緩慢加入0.75mL濃硫酸，混勻，冰水浴中靜置30min。8000g 4℃離心10min，取上清液，用蒸餾水稀釋20倍后待測。

測定步驟：

1、分光光度計預熱30min以上，調節波長至620nm，蒸餾水調零。

2、調節水浴鍋至95度。

3、工作液的配制：在試劑二中加入4mL試劑三，充分溶解，如較難溶解，可加熱攪拌；用不完的試劑4℃保存一周；

4、加樣表（在EP管中反應）：

混勻，置95度水浴中10min（蓋緊，以防止水分散失），冷卻至室溫后，于620nm處，分別讀取空白管和測定管吸光值，ΔA=A測定管-A空白管。

注意：

1、空白管只要做一管。

2、由于濃硫酸具有強腐蝕性，請謹慎操作。

纖維素含量計算：

1、標準條件下測定的回歸方程為y = 7.875x - 0.0043；x為標準品濃度（mg/mL），y為吸光值。

2、按樣本質量計算：

纖維素（mg /g干重）= [(ΔA＋0.0043) ÷7.875×V1]÷（W×V1÷V2）×20=3.17×(ΔA＋0.0043) ÷W。

V1：加入樣本體積，0.3mL；V2：加入提取液體積，1.25mL；W：樣本干重，約5×10-3g；20：樣本稀釋倍數。

注意：最低檢測限為1mg/g干重或10ng/ mg prot

注意：

1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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