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產品名稱	檢測方法	規格	貨號
活性污泥堿性蛋白酶（Solid - Alcalase Protease，S-ALPT）試劑盒	分光光度法	50管/24樣	CS-01Ｓ63463

注意：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

土壤蛋白酶參與土壤中存在的氨基酸、蛋白質以及其他含蛋白質氮的有機化合物的轉化，其水解產物是高等植物的氮源之一。S-ALPT在堿性環境下催化蛋白質水解，與土壤有機質含量、氮素及其他土壤性質有關。

商品介紹：

測定原理：

堿性條件下，S-ALPT可將酪蛋白水解產生酪氨酸；在堿性條件下，酪氨酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍；在680nm有特征吸收峰。

實驗中所需儀器及設備：

可見分光光度計、水浴鍋、磁力攪拌器、可調式移液槍、1ml玻璃比色皿、蒸餾水。

試劑組成和配置：

試劑一：液體60mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入10ml蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑4℃保存；

試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入100uL試劑七使粉劑潤濕，然后加入20ml試劑一，轉入燒杯中沸水浴磁力攪拌溶解后待用；用不完的試劑4℃保存；（可在燒杯上蓋一層保鮮膜，注意觀察，避免水分全部蒸發，一般加熱15-30分鐘，該試劑為過飽和試劑，充分混勻后仍出現顆粒物不溶物不影響使用）。

試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入50ml蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑4℃保存；

試劑五：液體10mL×1瓶，4℃保存；

試劑六：液體1.5mL×1支，50μg/ml標準酪氨酸溶液；

試劑七：液體1.5mL×1支，4℃保存；

樣品處理：

胞外酶：取1mL樣本，8000g 25℃離心10min，取上清液測定。

胞內酶: 取1mL樣本，8000g 25℃離心10min，棄上清，在沉淀中加入1mL蒸餾水，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3秒，間隔10秒，重復30次），8000g 25℃離心10min，取上清液測定。

測定操作：

1、分光光度計預熱30min以上，調節波長至680nm，蒸餾水調零。

2、試劑二、三和四40℃水浴10min。

3、樣本測定：

混勻，40℃水浴20min，680nm下讀取各管吸光值A

注意：標準管只需測一次。每個測定管設一個對照管。

S-ALPT活性計算：

（1）按樣本體積計算

單位定義：每min每mL樣本產生1μg酪氨酸為一個 S-ALPT活力單位。

S-ALPT(μg/min/mL)=C標準×(A測定管-A對照管)÷A標準管×V反總÷V樣÷T=35×(A測定管-A對照管)÷A標準管

（2）按樣本蛋白濃度計算

單位定義：每min每mg組織蛋白產生1μg酪氨酸為一個 S-ALPT活力單位。

S-ALPT(μg/min/mg prot)=C標準×(A測定管-A對照管)÷A標準管×V反總÷V樣÷T÷Cpr =35×(A測定管-A對照管)÷A標準管÷Cpr

C標準管：標準管濃度， 50μg/mL；V反總：反應體系總體積，0.42mL；T：反應時間，30min； V樣：樣本體積，0.02mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL。

注意：

1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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